ڈائریکٹ RT-qPCR کٹ
تفصیل
ڈائریکٹ RT-qPCR کٹ الگ سے پیک شدہ RT-qPCR بفر اور اعلیٰ موثر انزائم فراہم کرتی ہے۔مرکب (Taq、M-MLV、RI)، اسے بیک اینڈ کٹس اور سسٹم بنانے کے لیے آسان بناتا ہےایڈجسٹمنٹ، سادہ تصدیق کے اندر۔
وضاحتیں
500T، 50,000T
کٹ کے اجزاء
کٹ کا مواد (20 μL رد عمل کا نظام) | IM-05111-01 | IM-05112-01 |
500 ٹی | 50,000 T | |
براہ راست انزائم مرکب | 500 μL×1 | 50 ملی لیٹر×1 |
2× ڈائریکٹ RT-qPCR بفر | 1 ملی لیٹر×5 | 500 ملی لیٹر×1 |
ہدایت | 1 | 1 |
آپریٹنگ اقدامات
ریجنٹ کی تیاری سے پہلے، کٹ میں موجود تمام ری ایجنٹس کو کمرے کے درجہ حرارت پر پگھلا کر آہستہ سے ملا دینا چاہیے۔
A: تیار کریں۔ of سانچے اور ری ایجنٹ
1. تیار شدہ آر این اے ٹیمپلیٹ تیار کریں (آر این اے ٹیمپلیٹ کو نکالنے اور صاف کرنے کے لئے فورجین ٹوٹل آر این اے آئسولیشن کٹ سیریز کٹ استعمال کرنے کی سفارش کی جاتی ہے) یا نمونہ کریکنگ پروڈکٹ (فورجین لائسس سسٹم استعمال کرنے کی سفارش کی جاتی ہے)، مخصوص پرائمر (10 μM) اور دیگر متعلقہ استعمال کی اشیاء، آلہ۔
2. 2× ڈائریکٹ RT-qPCR بفر، RNase-Free ddH2O اور 20× ROX حوالہ رنگ ڈالیں (اگر یہ's کی ضرورت ہے) برف کے ساتھ باکس میں، ان کو قدرتی طور پر پگھلا کر، اور آہستہ سے ملایا جاتا ہے۔
B: تیار کریں۔ of RT-qPCR نظام
ٹیبل 1 : تیار کریں۔ of RT-qPCR sنظام
جزو | حجم | حتمی ارتکاز |
2× ڈائریکٹ RT-qPCR بفر | 10 μL | 1× |
براہ راست انزائم مرکب | 1μL | |
فارورڈ پرائمر (10 μM) | 0.8 μL | 50-900nM |
ریورس پرائمر (10 μM) | 0.8 μL | 50-900nM |
تحقیقات (4 μM) | 1μL | 200nM |
سانچہ(RNA یا Lysate) | X μL | |
20×ROX حوالہ رنگ | - | 1* |
RNase-FreeddH2O | (6.4-X) μL | |
مکمل حجم | 20μL |
C: سیٹ دی RT-qPCR ردعمل پروگرام
ٹیبل 2 : RT-qPCR رد عملon پروگرام ترتیب (کے لیے مثال: دو-قدم طریقہ)
قدم | درجہ حرارت | وقت | سائیکل | مواد | |
1 | 50℃ | 15 منٹ | 1* | 1 | ریورس ٹرانسکرپشن |
2 | 95℃ | 1 منٹ | 1 | پری ڈینیچریشن | |
3 | 95℃ | 10 سیکنڈ | 40-45 | ڈینیچریشن | |
60℃ | 30 سیکنڈ 2* | اینیل/توسیع |
اسٹوریج اور شیلف زندگی
-کِٹ کو -20 پر ذخیرہ کیا جانا چاہیے۔± 5℃.میعاد کی مدت 12 ماہ ہے۔
بار بار منجمد پگھلنے کے چکروں سے بچیں (<5 سائیکل)۔