سیل ڈائریکٹ RT qPCR کٹ—SYBR GREEN I ڈائریکٹ سیل لیسز سیل تیار ایک قدمی qRT-PCR کٹس
تفصیل
یہ کٹ ایک منفرد lysis بفر سسٹم کا استعمال کرتی ہے جو RT-qPCR کے رد عمل کے لیے کلچرڈ سیل کے نمونوں سے آر این اے کو تیزی سے جاری کر سکتا ہے، اس طرح وقت طلب اور محنت طلب RNA صاف کرنے کے عمل کو ختم کر دیتا ہے۔آر این اے ٹیمپلیٹ صرف 7 منٹ میں حاصل کیا جا سکتا ہے۔5×ڈائریکٹ RT مکس اور 2×کٹ کے ذریعہ فراہم کردہ ڈائریکٹ qPCR Mix-SYBR ری ایجنٹس فوری اور مؤثر طریقے سے حقیقی وقت میں مقداری PCR نتائج حاصل کر سکتے ہیں۔
5×ڈائریکٹ RT مکس اور 2×ڈائریکٹ qPCR مکس-SYBR میں مضبوط روک تھام کرنے والی رواداری ہے، اور نمونوں کی lysate کو براہ راست RT-qPCR کے ٹیمپلیٹ کے طور پر استعمال کیا جا سکتا ہے۔اس کٹ میں منفرد آر این اے ہائی فینیٹی فورجین ریورس ٹرانسکرپٹیز، اور ہاٹ ڈی ٹاک ڈی این اے پولیمریز، ڈی این ٹی پیز، ایم جی سی ایل شامل ہیں۔2، ردعمل بفر، پی سی آر آپٹیمائزر اور سٹیبلائزر۔
وضاحتیں
200×20μl Rxns، 1000×20μl Rxns
کٹ کے اجزاء
| حصہ اول | بفر سی ایل |
| فارجین پروٹیز پلس II | |
| بفر ایس ٹی | |
| حصہ دوم | ڈی این اے صاف کرنے والا |
| 5× ڈائریکٹ RT مکس | |
| 2× ڈائریکٹ qPCR مکس-SYBR | |
| 50× ROX حوالہ رنگ | |
| RNase فری ddH2O | |
| ہدایات | |
خصوصیات اور فوائد
■سادہ اور موثر: سیل ڈائریکٹ RT ٹیکنالوجی کے ساتھ، RNA نمونے صرف 7 منٹ میں حاصل کیے جا سکتے ہیں۔
■ نمونے کی مانگ کم ہے، کم از کم 10 سیلز کی جانچ کی جا سکتی ہے۔
■ ہائی تھرو پٹ: یہ 384، 96، 24، 12، 6 کنویں پلیٹوں میں مہذب خلیوں میں RNA کا تیزی سے پتہ لگا سکتا ہے۔
■ ڈی این اے صاف کرنے والا جاری ہونے والے جینوم کو تیزی سے ہٹا سکتا ہے، بعد میں آنے والے تجرباتی نتائج پر اثرات کو بہت کم کر سکتا ہے۔
■ آپٹمائزڈ RT اور qPCR سسٹم دو قدمی RT-PCR ریورس ٹرانسکرپشن کو زیادہ موثر اور PCR کو زیادہ مخصوص، اور RT-qPCR ردعمل روکنے والوں کے خلاف زیادہ مزاحم بناتا ہے۔
کٹ کی درخواست
درخواست کا دائرہ: مہذب خلیات۔
- نمونہ لیسس کے ذریعہ جاری کردہ RNA: صرف اس کٹ کے RT-qPCR ٹیمپلیٹ پر لاگو ہوتا ہے۔
- کٹ کو درج ذیل مقاصد کے لیے استعمال کیا جا سکتا ہے: جین کے اظہار کا تجزیہ، siRNA-ثالثی جین کے خاموشی کے اثر کی تصدیق، منشیات کی اسکریننگ وغیرہ۔
خاکہ
اسٹوریج اور شیلف زندگی
اس کٹ کے حصہ I کو 4℃ پر ذخیرہ کیا جانا چاہیے۔حصہ II کو -20℃ پر ذخیرہ کیا جانا چاہیے۔
Foregene Protease Plus II کو 4 پر ذخیرہ کیا جانا چاہیے۔℃، -20℃ پر منجمد نہ کریں۔
ریجنٹ 2×ڈائریکٹ qPCR Mix-SYBR کو -20 پر اسٹور کیا جانا چاہیے۔℃اندھیرے میں؛اگر کثرت سے استعمال کیا جائے تو اسے 4 پر بھی ذخیرہ کیا جا سکتا ہے۔℃ قلیل مدتی اسٹوریج کے لیے (10 دن کے اندر استعمال کریں)۔
ریئل ٹائم پی سی آر پرائمر ڈیزائن کے اصول
فارورڈ پرائمر اور ریورس پرائمر
ریئل ٹائم پی سی آر کے لیے، پرائمر ڈیزائن بہت اہم ہے۔پرائمر کا تعلق پی سی آر ایمپلیفیکیشن کی خاصیت اور کارکردگی سے ہے، اور اسے درج ذیل اصولوں کے حوالے سے ڈیزائن کیا جا سکتا ہے۔
پرائمر کی لمبائی: 18-30bp۔
جی سی مواد: 40-60٪۔
ٹی ایم ویلیو: پرائمر ڈیزائن سافٹ ویئر، جیسے پرائمر 5، پرائمر کی ٹی ایم ویلیو دے سکتا ہے۔اپ سٹریم اور ڈاون سٹریم پرائمر کی Tm قدریں ہر ممکن حد تک قریب ہونی چاہئیں۔Tm حساب کا فارمولا بھی استعمال کیا جا سکتا ہے: Tm = 4 °C (G + C) + 2 °C (A + T)۔PCR کو انجام دیتے وقت، 5 °C کی پرائمر Tm قدر سے کم درجہ حرارت کو عام طور پر اینیلنگ درجہ حرارت کے طور پر منتخب کیا جاتا ہے (اینیلنگ درجہ حرارت میں اسی طرح کا اضافہ PCR ردعمل کی خصوصیت کو بڑھا سکتا ہے)۔
پرائمر اور پی سی آر مصنوعات:
ڈیزائن پرائمر پی سی آر ایمپلیفیکیشن مصنوعات کی لمبائی ترجیحاً 100-150bp ہے۔
ٹیمپلیٹ کے ثانوی ساختی علاقے میں ڈیزائن پرائمر سے جتنا ممکن ہو گریز کیا جانا چاہیے۔
اپ اسٹریم اور ڈاون اسٹریم پرائمر کے 3′ سروں کے درمیان 2 یا زیادہ تکمیلی بنیادوں کی تشکیل سے گریز کریں۔
پرائمر 3′ ٹرمینل بیس 3 اضافی مسلسل G یا C کے ساتھ موجود نہیں ہو سکتا۔
پرائمر میں خود تکمیلی ڈھانچے نہیں ہو سکتے، ورنہ بالوں کے پین کا ڈھانچہ بن جائے گا، جو پی سی آر ایمپلیفیکیشن کو متاثر کرے گا۔
ATCG کو پرائمر کی ترتیب میں جتنا ممکن ہو یکساں طور پر تقسیم کیا جانا چاہیے، اور 3′ ٹرمینل بیس کو T کے طور پر گریز کیا جانا چاہیے۔
ضمیمہ 1: سیل ڈائریکٹ RT-qPCR کٹ اجزاء کا سپلیمنٹ پیک
1.سیل لیسس حل
|
| |||
| کٹ کے اجزاء (24 کنویں لیسز سسٹم / کنواں) | DRT-01011-A1 | DRT-01011-A2 | |
| 100 ٹی | 500 ٹی | ||
| حصہمیں | بفر سی ایل | 20 ملی لیٹر | 100 ملی لیٹر |
| فارجین پروٹیز پلس II | 400 μl | 1 ملی × 2 | |
| بفر ایس ٹی | 1 ملی × 2 | 10 ملی لیٹر | |
| حصہII | ڈی این اے صاف کرنے والا | 400 μl | 1 ملی × 2 |
2.RT مکس
|
| |
| کٹ کے اجزاء (20 μl رد عمل کا نظام) | DRT-01011-B1 |
| 200 ٹی | |
| 5× ڈائریکٹ RT مکس | 800 μl |
| RNase فری ddH2O | 1.7 ملی لیٹر × 2 |
|
| ||
| کٹ کے اجزاء (20 μl رد عمل کا نظام) | DRT-01011-C1 | DRT-01011-C2 |
| 200 ٹی | 1000 ٹی | |
| 2× ڈائریکٹ qPCR مکس-SYBR | 1 ملی × 2 | 1.7 ملی لیٹر × 6 |
| 50× ROX حوالہ رنگ | 40 μl | 200 μl |
| RNase فری ddH2O | 1.7 ملی لیٹر | 10 ملی لیٹر |
ہدایت نامہ:
