(96-well) QuickEasy Cell Direct RT-qPCR کٹ – SYBR گرین I
تفصیل
دی(96-اچھی طرح) QuickEasyTM سیل ڈائریکٹ RT-qPCR کٹ-ایس وائی بی آر گرین آئیفراہم کرتا ہےایک منفرد lysis بفر نظامto جلدی سے آر این اے کو جاری کریں۔مہذب سیل سےRT-qPCR کے رد عمل کے نمونے، وقت طلب اور محنتی کو ختم کرتے ہیں۔آر این اے صاف کرنے کا عمل، اور مطلوبہ آر این اے ٹیمپلیٹ حاصل کرنے میں صرف 7 منٹ لگتے ہیں۔دی5× ڈائریکٹ RT مکساور2× ڈائریکٹ qPCR مکس-SYBRباکس میں فراہم کی جا سکتی ہے جلدی اورمؤثر طریقے سے ریئل ٹائم مقداری حاصل کریں۔پی سی آر کے نتائج۔
5× Direct RT Mix اور 2× Direct qPCR Mix-SYBR میں مضبوط روک تھام کرنے والی رواداری ہے، اور یہ نمونے کے lysate کو موثر ریورس ٹرانسکرپشن اور مخصوص ایمپلیفیکیشن کے لیے ٹیمپلیٹ کے طور پر جانچنے کے لیے استعمال کر سکتے ہیں۔ریجنٹ میں آر این اے کے ساتھ اعلی تعلق کے ساتھ فورجین منفرد ریورس ٹرانسکرپٹیز، نیز گرم D-Taq DNA پولیمریز، dNTPs، MgCl شامل ہیں۔2 ، ری ایکشن بفر، پی سی آر آپٹیمائزر اور سٹیبلائزر، اور نمونے کو جلدی، آسانی سے اور درست طریقے سے پتہ لگانے کے لیے لیسز بفر کے ساتھ مل کر استعمال کیا جا سکتا ہے، اور اس میں اعلیٰ حساسیت، مضبوط مخصوصیت اور اچھی استحکام کی خصوصیات ہیں۔
اس کٹ کا مقصد 96 اچھی طرح سے کلچرڈ سیلز کا مائیکرو سسٹم لیسس کرنا ہے، اور اس میں اچھی یکسانیت اور مستقل مزاجی ہے۔کٹ کے اجزاء 96 lysis کے رد عمل، 96 ریورس ٹرانسکرپشن ری ایکشنز اور 96×2 qPCR رد عمل فراہم کرتے ہیں، جو 96 کنویں سیل پلیٹ کو ایک بار استعمال کرنے کے لیے پورا کر سکتے ہیں، ری ایجنٹس کے بار بار کھلنے، جمنے اور پگھلنے کی وجہ سے پیدا ہونے والی آلودگی اور ریجنٹ کی کارکردگی میں کمی سے بچ سکتے ہیں۔
کٹ کے اجزاء
| کٹ کی ساخت ( 50 μایل لیسس سسٹم/20 μLRT رد عمل کا نظام /20μایل کیو پی سی آر ری ایکشن سسٹم) | DRT-03011 | تبصرہ | |
| 96T | |||
| حصہI | بفرCL | 5 ملی لیٹر | سیلLysis |
| فارجینپروٹیز پلس II | 100 μL | ||
| بفرST | 500 μL | ||
| حصہ II | ڈی این اےصاف کرنے والا | 100 μL | |
| 5× ڈائریکٹ RT مکس | 400 μL | RT | |
| 2× ڈائریکٹ کیو پی سی آر مکس-SYBR | 1 میٹرL × 2 | کیو پی سی آر | |
| 50× ROX حوالہ رنگ | 400µL | ||
| آر نیس- مفتڈی ڈی ایچ2 O | 1.7 ملی لیٹر |
| |
| Mسالانہ | 1 ٹکڑا | 1 سرونگ | |
*: lysis reagent DNA صافی کٹ کے حصہ II میں شامل ہے۔Cell Lysis، RT، اور qPCR اجزاء الگ سے خریدے جا سکتے ہیں۔
خصوصیات اور فوائد
■سادہ اور موثر: سیل ڈائریکٹ RT ٹیکنالوجی کے ساتھ، RNA نمونے صرف 7 منٹ میں حاصل کیے جا سکتے ہیں۔
■ نمونے کی مانگ کم ہے، کم از کم 10 سیلز کی جانچ کی جا سکتی ہے۔
■ ہائی تھرو پٹ: یہ 384، 96، 24، 12، 6 کنویں پلیٹوں میں مہذب خلیوں میں RNA کا تیزی سے پتہ لگا سکتا ہے۔
■ ڈی این اے صاف کرنے والا جاری ہونے والے جینوم کو تیزی سے ہٹا سکتا ہے، بعد میں آنے والے تجرباتی نتائج پر اثرات کو بہت کم کر سکتا ہے۔
■ آپٹمائزڈ RT اور qPCR سسٹم دو قدمی RT-PCR ریورس ٹرانسکرپشن کو زیادہ موثر اور PCR کو زیادہ مخصوص، اور RT-qPCR ردعمل روکنے والوں کے خلاف زیادہ مزاحم بناتا ہے۔
کٹ کی درخواست
درخواست کا دائرہ: مہذب خلیات۔
- نمونہ لیسس کے ذریعہ جاری کردہ RNA: صرف اس کٹ کے RT-qPCR ٹیمپلیٹ پر لاگو ہوتا ہے۔
- کٹ کو درج ذیل مقاصد کے لیے استعمال کیا جا سکتا ہے: جین کے اظہار کا تجزیہ، siRNA-ثالثی جین کے خاموشی کے اثر کی تصدیق، منشیات کی اسکریننگ وغیرہ۔
اسٹوریج اور شیلف زندگی
اس کٹ کا حصہ I 4 پر ذخیرہ کیا جانا چاہئے۔℃;حصہ II کو -20℃ پر ذخیرہ کیا جانا چاہیے۔
Foregene Protease Plus II کو 4 پر ذخیرہ کیا جانا چاہیے۔℃، -20℃ پر منجمد نہ کریں۔
ریجنٹ 2×براہ راست qPCR مکس-تقمان کو -20 پر ذخیرہ کیا جانا چاہئے۔℃اندھیرے میں؛اگر کثرت سے استعمال کیا جائے تو اسے 4 پر بھی ذخیرہ کیا جا سکتا ہے۔℃ قلیل مدتی اسٹوریج کے لیے (10 دن کے اندر استعمال کریں)۔
ریئل ٹائم پی سی آر پرائمر ڈیزائن کے اصول
فارورڈ پرائمر اور ریورس پرائمر
ریئل ٹائم پی سی آر کے لیے، پرائمر ڈیزائن بہت اہم ہے۔پرائمر کا تعلق پی سی آر ایمپلیفیکیشن کی خاصیت اور کارکردگی سے ہے، اور اسے درج ذیل اصولوں کے حوالے سے ڈیزائن کیا جا سکتا ہے۔
- پرائمر کی لمبائی: 18-30bp۔
- جی سی مواد: 40-60٪۔
- ٹی ایم ویلیو: پرائمر ڈیزائن سافٹ ویئر، جیسے پرائمر 5، پرائمر کی ٹی ایم ویلیو دے سکتا ہے۔اپ اسٹریم اور ڈاون اسٹریم پرائمر کی Tm قدریں زیادہ سے زیادہ قریب ہونی چاہئیں۔Tm حساب کا فارمولا بھی استعمال کیا جا سکتا ہے: Tm = 4 °C (G + C) + 2 °C (A + T)۔PCR کو انجام دیتے وقت، 5 °C کی پرائمر Tm قدر سے کم درجہ حرارت کو عام طور پر اینیلنگ درجہ حرارت کے طور پر منتخب کیا جاتا ہے (اینیلنگ درجہ حرارت میں اسی طرح کا اضافہ PCR ردعمل کی خصوصیت کو بڑھا سکتا ہے)۔
- پرائمر اور پی سی آر مصنوعات:
- ڈیزائن پرائمر پی سی آر ایمپلیفیکیشن مصنوعات کی لمبائی ترجیحاً 100-150bp ہے۔
- ٹیمپلیٹ کے ثانوی ساختی علاقے میں ڈیزائن پرائمر سے جتنا ممکن ہو گریز کیا جانا چاہیے۔
- اپ اسٹریم اور ڈاون اسٹریم پرائمر کے 3′ سروں کے درمیان 2 یا زیادہ تکمیلی بنیادوں کی تشکیل سے گریز کریں۔
- پرائمر 3′ ٹرمینل بیس 3 اضافی مسلسل G یا C کے ساتھ موجود نہیں ہو سکتا۔
- پرائمر خود تکمیلی ڈھانچے نہیں رکھ سکتے ہیں، ورنہ بالوں کے پین کا ڈھانچہ بن جائے گا، جس سے پی سی آر ایمپلیفیکیشن متاثر ہوگا۔
- ATCG کو پرائمر کی ترتیب میں جتنا ممکن ہو یکساں طور پر تقسیم کیا جانا چاہیے، اور 3′ ٹرمینل بیس کو T کے طور پر گریز کیا جانا چاہیے۔
اپینڈکس1: سیبراہ راستRT-qPCR کٹ کا جزوٹی سپلیمنٹ پیک
1. سیل لیسس حل
| سیل لیسس حل | |||
| کٹ کے اجزاء (24 کنویں لیسز سسٹم / کنواں) | DRT-01011-A1 | DRT-01011-A2 | |
| 100 ٹی | 500 ٹی | ||
| حصہمیں | بفر سی ایل | 20 ملی لیٹر | 100 ملی لیٹر |
| فارجین پروٹیز پلس II | 400 μl | 1 ملی × 2 | |
| بفر ایس ٹی | 1 ملی × 2 | 10 ملی لیٹر | |
| حصہII | ڈی این اے صاف کرنے والا | 400 μl | 1 ملی × 2 |
| RT مکس | |
| کٹ کے اجزاء (20 μl رد عمل کا نظام) | DRT-01011-B1 |
| 200 ٹی | |
| 5× ڈائریکٹ RT مکس | 800 μl |
| RNase فری ddH2O | 1.7 ملی لیٹر × 2 |
| کیو پی سی آر مکس | ||
| کٹ کے اجزاء (20 μl رد عمل کا نظام) | DRT-01021-C1 | DRT-01021-C2 |
| 200 ٹی | 1000 ٹی | |
| 2× ڈائریکٹ qPCR مکس-تقمان | 1 ملی × 2 | 1.7 ملی لیٹر × 6 |
| 20× ROX حوالہ رنگ | 40 μl | 200 μl |
| RNase فری ddH2O | 1.7 ملی لیٹر | 10 ملی لیٹر |
ہدایت نامہ:
