سیل ڈائریکٹ RT qPCR کٹ—تقمان ڈائریکٹ سیل لیسز سیل ریڈی ون سٹیپ qRT-PCR کٹس پروب
تفصیل
یہ پراڈکٹ RT-qPCR کے رد عمل کے لیے کلچرڈ سیل کے نمونوں سے RNA کو فوری طور پر جاری کرنے کے لیے ایک منفرد lysis بفر سسٹم کا استعمال کرتی ہے، جس سے وقت طلب اور محنت طلب RNA صاف کرنے کے عمل کو ختم کیا جاتا ہے، اور مطلوبہ RNA ٹیمپلیٹ حاصل کرنے کے لیے صرف 7 منٹ، 5× Direct RT مکس، 2× Direct qPCR Mix-Taciant کے ذریعے فوری طور پر فراہم کیا جاتا ہے۔ نتائج
5× ڈائریکٹ RT مکس اور 2 × ڈائریکٹ qPCR مکس-تقمان میں مضبوط روک تھام کرنے والی رواداری ہے اور یہ نمونے کے لائسیٹ کا استعمال کرتے ہوئے ایک ٹیمپلیٹ کے طور پر پیمائش کرنے کے لیے موثر الٹ اور مخصوص ایمپلیفیکیشن انجام دے سکتے ہیں۔ریجنٹ میں Foregene Reverse Transscriptase، Hot D-Taq DNA Polymerase، dNTPs، MgCl ہوتا ہے۔2, Reaction Buffer, PCR Optimizer اور Stabilizer، جو lysis buffer کے ساتھ نمونوں کا جلدی اور آسانی سے پتہ لگانے کے لیے استعمال کیا جا سکتا ہے، اور اس میں اعلیٰ حساسیت، مخصوصیت اور استحکام کی خصوصیات ہیں۔
وضاحتیں
200×20μl Rxns، 1000×20μl Rxns
کٹ کے اجزاء
| QuickEasyTMسیل ڈائریکٹ RT-qPCR کٹ-تقمان | ||||
| کٹ کے اجزاء 20μl qPCR ری ایکشن سسٹم | DRT-01021 | DRT-01022 | نوٹ | |
| 200 ٹی | 1000 ٹی | |||
|
حصہ I | بفر سی ایل | 4 ملی لیٹر | 20 ملی لیٹر | سیل لیسس |
| فارجین پروٹیز پلس II | 80 μl | 400 μl | ||
| بفر ایس ٹی | 400 μl | 1 ملی × 2 | ||
|
حصہ II | ڈی این اے صاف کرنے والا | 80 μl | 400 μl | |
| 5×Direct RT مکس * | 160 μl | 800 μl | RT | |
| 2× ڈائریکٹ qPCR مکس-تقمان * | 1 ملی × 2 | 1.7 ملی لیٹر × 6 | کیو پی سی آر | |
| 20×ROX حوالہ رنگ | 40 μl | 200 μl | ||
| RNase فری ddH2O | 1.7 ملی لیٹر | 10 ملی لیٹر | ||
| ہدایت نامہ | 1 ٹکڑا | 1 ٹکڑا | ||
*:سیل لائسس، 5×ڈائریکٹ آر ٹی مکس، 2× ڈائریکٹ کیو پی سی آر مکس-تقمان کو الگ سے خریدا جا سکتا ہے۔
خصوصیات اور فوائد
■سادہ اور موثر: سیل ڈائریکٹ RT ٹیکنالوجی کے ساتھ، RNA نمونے صرف 7 منٹ میں حاصل کیے جا سکتے ہیں۔
■ نمونے کی مانگ کم ہے، کم از کم 10 سیلز کی جانچ کی جا سکتی ہے۔
■ ہائی تھرو پٹ: یہ 384، 96، 24، 12، 6 کنویں پلیٹوں میں مہذب خلیوں میں RNA کا تیزی سے پتہ لگا سکتا ہے۔
■ ڈی این اے صاف کرنے والا جاری ہونے والے جینوم کو تیزی سے ہٹا سکتا ہے، بعد میں آنے والے تجرباتی نتائج پر اثرات کو بہت کم کر سکتا ہے۔
■ آپٹمائزڈ RT اور qPCR سسٹم دو قدمی RT-PCR ریورس ٹرانسکرپشن کو زیادہ موثر اور PCR کو زیادہ مخصوص، اور RT-qPCR ردعمل روکنے والوں کے خلاف زیادہ مزاحم بناتا ہے۔
کٹ کی درخواست
درخواست کا دائرہ: مہذب خلیات۔
- نمونہ لیسس کے ذریعہ جاری کردہ RNA: صرف اس کٹ کے RT-qPCR ٹیمپلیٹ پر لاگو ہوتا ہے۔
- کٹ کو درج ذیل مقاصد کے لیے استعمال کیا جا سکتا ہے: جین کے اظہار کا تجزیہ، siRNA-ثالثی جین کے خاموشی کے اثر کی تصدیق، منشیات کی اسکریننگ وغیرہ۔
اسٹوریج اور شیلف زندگی
اس کٹ کا حصہ I 4 پر ذخیرہ کیا جانا چاہئے۔℃;حصہ II کو -20℃ پر ذخیرہ کیا جانا چاہیے۔
Foregene Protease Plus II کو 4 پر ذخیرہ کیا جانا چاہیے۔℃، -20℃ پر منجمد نہ کریں۔
ریجنٹ 2×براہ راست qPCR مکس-تقمان کو -20 پر ذخیرہ کیا جانا چاہئے۔℃اندھیرے میں؛اگر کثرت سے استعمال کیا جائے تو اسے 4 پر بھی ذخیرہ کیا جا سکتا ہے۔℃ قلیل مدتی اسٹوریج کے لیے (10 دن کے اندر استعمال کریں)۔
ریئل ٹائم پی سی آر پرائمر ڈیزائن کے اصول
فارورڈ پرائمر اور ریورس پرائمر
ریئل ٹائم پی سی آر کے لیے، پرائمر ڈیزائن بہت اہم ہے۔پرائمر کا تعلق پی سی آر ایمپلیفیکیشن کی خاصیت اور کارکردگی سے ہے، اور اسے درج ذیل اصولوں کے حوالے سے ڈیزائن کیا جا سکتا ہے۔
- پرائمر کی لمبائی: 18-30bp۔
- جی سی مواد: 40-60٪۔
- ٹی ایم ویلیو: پرائمر ڈیزائن سافٹ ویئر، جیسے پرائمر 5، پرائمر کی ٹی ایم ویلیو دے سکتا ہے۔اپ اسٹریم اور ڈاون اسٹریم پرائمر کی Tm قدریں زیادہ سے زیادہ قریب ہونی چاہئیں۔Tm حساب کا فارمولا بھی استعمال کیا جا سکتا ہے: Tm = 4 °C (G + C) + 2 °C (A + T)۔PCR کو انجام دیتے وقت، 5 °C کی پرائمر Tm قدر سے کم درجہ حرارت کو عام طور پر اینیلنگ درجہ حرارت کے طور پر منتخب کیا جاتا ہے (اینیلنگ درجہ حرارت میں اسی طرح کا اضافہ PCR ردعمل کی خصوصیت کو بڑھا سکتا ہے)۔
- پرائمر اور پی سی آر مصنوعات:
- ڈیزائن پرائمر پی سی آر ایمپلیفیکیشن مصنوعات کی لمبائی ترجیحاً 100-150bp ہے۔
- ٹیمپلیٹ کے ثانوی ساختی علاقے میں ڈیزائن پرائمر سے جتنا ممکن ہو گریز کیا جانا چاہیے۔
- اپ اسٹریم اور ڈاون اسٹریم پرائمر کے 3′ سروں کے درمیان 2 یا زیادہ تکمیلی بنیادوں کی تشکیل سے گریز کریں۔
- پرائمر 3′ ٹرمینل بیس 3 اضافی مسلسل G یا C کے ساتھ موجود نہیں ہو سکتا۔
- پرائمر خود تکمیلی ڈھانچے نہیں رکھ سکتے ہیں، ورنہ بالوں کے پین کا ڈھانچہ بن جائے گا، جس سے پی سی آر ایمپلیفیکیشن متاثر ہوگا۔
- ATCG کو پرائمر کی ترتیب میں جتنا ممکن ہو یکساں طور پر تقسیم کیا جانا چاہیے، اور 3′ ٹرمینل بیس کو T کے طور پر گریز کیا جانا چاہیے۔
اپینڈکس1: سیبراہ راستRT-qPCR کٹ کا جزوٹی سپلیمنٹ پیک
1. سیل لیسس حل
| سیل لیسس حل | |||
| کٹ کے اجزاء (24 کنویں لیسز سسٹم / کنواں) | DRT-01011-A1 | DRT-01011-A2 | |
| 100 ٹی | 500 ٹی | ||
| حصہمیں | بفر سی ایل | 20 ملی لیٹر | 100 ملی لیٹر |
| فارجین پروٹیز پلس II | 400 μl | 1 ملی × 2 | |
| بفر ایس ٹی | 1 ملی × 2 | 10 ملی لیٹر | |
| حصہII | ڈی این اے صاف کرنے والا | 400 μl | 1 ملی × 2 |
| RT مکس | |
| کٹ کے اجزاء (20 μl رد عمل کا نظام) | DRT-01011-B1 |
| 200 ٹی | |
| 5× ڈائریکٹ RT مکس | 800 μl |
| RNase فری ddH2O | 1.7 ملی لیٹر × 2 |
| کیو پی سی آر مکس | ||
| کٹ کے اجزاء (20 μl رد عمل کا نظام) | DRT-01021-C1 | DRT-01021-C2 |
| 200 ٹی | 1000 ٹی | |
| 2× ڈائریکٹ qPCR مکس-تقمان | 1 ملی × 2 | 1.7 ملی لیٹر × 6 |
| 20× ROX حوالہ رنگ | 40 μl | 200 μl |
| RNase فری ddH2O | 1.7 ملی لیٹر | 10 ملی لیٹر |
ہدایت نامہ:
