اینیمل ٹوٹل آر این اے آئسولیشن کٹ جانوروں کے ٹشوز اور سیل کے لیے کل آر این اے نکالنے اور پیوریفیکیشن کٹس
کٹ کی تفصیل:
مختلف جانوروں کے بافتوں سے جلدی اور مؤثر طریقے سے اعلیٰ پاکیزگی اور اعلیٰ معیار کے کل RNA نکالیں۔
آر این اے کے انحطاط کے بارے میں فکر کرنے کی ضرورت نہیں ہے۔پورا نظام RNase فری ہے۔
ڈی این اے کلیننگ کالم کا استعمال کرتے ہوئے مؤثر طریقے سے ڈی این اے کو ہٹا دیں۔
DNase شامل کیے بغیر ڈی این اے کو ہٹا دیں۔
سادہ — تمام آپریشنز کمرے کے درجہ حرارت پر مکمل ہوتے ہیں۔
تیز رفتار آپریشن 30 منٹ میں مکمل کیا جا سکتا ہے۔
محفوظ - کوئی نامیاتی ریجنٹ استعمال نہیں کیا گیا۔
اعلی طہارت —OD260/280≈1.8-2.1
کٹس کی تفصیل
50 پریپس، 200 پریپس
یہ کٹ استعمال کرتی ہے۔اسپن کالم اور فارمولہہماری کمپنی کی طرف سے تیار کیا گیا ہے، جو اعلیٰ کارکردگی کے ساتھ جانوروں کے مختلف بافتوں سے اعلیٰ پاکیزگی اور اعلیٰ معیار کا کل RNA نکال سکتا ہے۔ یہ ایک موثر DNA-کلیننگ کالم فراہم کرتا ہے، جو آسانی سے سپرنٹنٹ اور ٹشو لیسیٹ سے جینومک DNA کو الگ اور جذب کر سکتا ہے، سادہ اور وقت کی بچت؛صرف آر این اے کالم مؤثر طریقے سے آر این اے کو باندھ سکتا ہے اور ایک منفرد فارمولے کے بہت سے نمونوں کے ساتھ بیک وقت کارروائی کی جا سکتی ہے۔
پورا نظام RNase سے پاک ہے، تاکہ نکالا RNA خراب نہ ہو۔بفر آر ڈبلیو 1، بفر آر ڈبلیو 2 بفر واشنگ سسٹم، تاکہ حاصل کردہ آر این اے پروٹین، ڈی این اے، آئن اور نامیاتی کمپاؤنڈ آلودگی سے پاک ہو۔
کٹ کے اجزاء
| جانوروں کی ٹوٹل آر این اے آئسولیشن کٹ | ||
| کٹ کے اجزاء | RE-03011 | RE-03014 |
| 50 ٹی | 200 ٹی | |
| بفر RL1* | 25 ملی لیٹر | 100 ملی لیٹر |
| بفر RL2 | 15 ملی لیٹر | 60 ملی لیٹر |
| بفر RW1* | 25 ملی لیٹر | 100 ملی لیٹر |
| بفر RW2 | 24 ملی لیٹر | 96 ملی لیٹر |
| RNase فری ddH2O | 10 ملی لیٹر | 40 ملی لیٹر |
| صرف RNA کالم | 50 | 200 |
| ڈی این اے کلیننگ کالم | 50 | 200 |
| ہدایت نامہ | 1 ٹکڑا | 1 ٹکڑا |
مصنوعات کی معلومات
| فارمیٹ | گھماؤ کالم | طہارت کا جزو | فارجین کالم، ریجنٹ |
| بہاؤ | 1-24 نمونے | وقت فی تیاری | ~30 منٹ (24 نمونے) |
| سینٹری فیوج | ڈیسک سینٹری فیوج | پائرولیسس علیحدگی | سینٹرفیوگل علیحدگی |
| نمونہ | جانوروں کے ٹشو؛سیل | نمونے کی مقدار | ٹشو: 10-20 ملی گرام؛سیل:(1-5)×106 |
| اخراج کا حجم | 50-200 μL | زیادہ سے زیادہ لوڈنگ والیوم | 850 μL |
خصوصیات اور فوائد
■ RNA انحطاط کے بارے میں فکر کرنے کی ضرورت نہیں؛پورا نظام RNase فری ہے۔
DNA-کا استعمال کرتے ہوئے DNA-کلیننگ کالم کو مؤثر طریقے سے ہٹا دیں۔
DNase شامل کیے بغیر DNA ہٹا دیں۔
■ سادہ تمام آپریشنز کمرے کے درجہ حرارت پر مکمل ہوتے ہیں۔
■ تیز آپریشن 30 منٹ میں مکمل کیا جا سکتا ہے۔
■ محفوظ - کوئی نامیاتی ریجنٹ درکار نہیں۔
■ اعلی طہارت -OD260/280≈1.8-2.1
کٹ کی درخواست
یہ مختلف قسم کے تازہ یا منجمد جانوروں کے بافتوں یا مہذب خلیوں سے کل RNA نکالنے اور صاف کرنے کے لیے موزوں ہے۔
پروڈکٹ کے پیرامیٹرز
■ ڈاؤن اسٹریم ایپلی کیشنز: فرسٹ اسٹرینڈ cDNA ترکیب، RT-PCR، مالیکیولر کلوننگ، ناردرن بلاٹ، وغیرہ۔
■ نمونے: جانوروں کے ٹشوز، مہذب خلیات
■ خوراک: ٹشوز 10-20mg، خلیات (2-5)×106
■ پیوریفیکیشن کالم کی ڈی این اے بائنڈنگ کی زیادہ سے زیادہ گنجائش: 80 μg
■ اخراج کا حجم: 50-200 μl
خاکہ
جانوروں کی ٹوٹل آر این اے آئسولیشن کٹ کا علاج 20 ملی گرام
ماؤس کے تازہ نمونے، 5% پیوریفائیڈ کل RNA 1% آگر لیں۔
گلائکوجل الیکٹروفورسس
1: تلی 2: گردہ
3: جگر 4: دل
اسٹوریج اور شیلف زندگی
کٹ کو کمرے کے درجہ حرارت (15–25 ℃) یا 2–8 ℃ پر زیادہ وقت کے لیے 24 مہینوں تک ذخیرہ کیا جا سکتا ہے۔بفر RL1 کو β-mercaptoethanol (اختیاری) شامل کرنے کے بعد 1 ماہ کے لیے 4 ℃ پر ذخیرہ کیا جا سکتا ہے۔
حوالہ جات مضامین
1۔IF:18.808:زینگ، کیو، کن، ایف، لوو، آر، وغیرہ۔مرکزی جامع ڈیزائن کی اصلاح کے ذریعے لیور بیس ایڈیٹنگ کے لیے mRNA-لوڈڈ لپڈ جیسے نینو پارٹیکلز۔Adv.فنکشنمیٹر2021, 31, 2011068.doi:10.1002/adfm.202011068.
2.IF:18.187:ہی ایکس، ہانگ ڈبلیو، یانگ جے، وغیرہ۔علاج کے اسٹیم سیل کی تیاری میں خلیوں کا بے ساختہ اپوپٹوس فاسفیٹائڈیلسرین کے اخراج کے ذریعے امیونو موڈولیٹری اثرات مرتب کرتا ہے۔سگنل کی نقل و حمل کا ہدف۔14 جولائی 2021؛ 6(1):270۔doi: 10.1038/s41392-021-00688-z۔
3.IF:17.97:Dai Z, Liu H, Liao J, et al.N7-Methylguanosine tRNA ترمیم آنکوجینک mRNA ترجمہ کو بڑھاتی ہے اور انٹراہیپیٹک کولانجیو کارسینوما کی ترقی کو فروغ دیتی ہے۔مول سیل۔29 جولائی 2021:S1097-2765(21)00555-4۔doi: 10.1016/j.molcel.2021.07.003۔
4.IF:9.225:Cao X, Shu Y, Chen Y, et al.Mettl14-Mediated m6A ترمیم Endoplasmic Reticulum Homeostasis کو برقرار رکھ کر جگر کی تخلیق نو کو سہولت فراہم کرتی ہے۔سیل Mol Gastroenterol Hepatol.2021؛12(2):633-651۔doi: 10.1016/j.jcmgh.2021.04.001۔
کے لیے آر این اے آئسولیشن کٹس دوسرے نمونے کے ذرائعدستیاب ہیں:
خلیہ، پودا، وائرل، خون وغیرہ۔
آر این اے نہیں نکالا جاتا ہے یا آر این اے کی پیداوار کم ہے۔
اکثر مختلف عوامل ہوتے ہیں جو بحالی کی کارکردگی کو متاثر کرتے ہیں، جیسے: ٹشو نمونہ آر این اے کا مواد، طریقہ کار، اخراج کا حجم، وغیرہ۔
1. آپریشن کے دوران آئس غسل یا کرائیوجینک (4 °C) سینٹرفیوگریشن کی گئی۔
تجویز: پورے عمل کے دوران کمرے کے درجہ حرارت (15-25 ° C) پر کام کریں، کم درجہ حرارت پر برف سے نہائیں اور سینٹری فیوج نہ کریں۔
2. نمونے کا نامناسب تحفظ یا ضرورت سے زیادہ نمونہ ذخیرہ کرنے کا وقت۔
تجویز: نمونوں کو -80 °C پر ذخیرہ کریں یا مائع نائٹروجن میں منجمد کریں اور بار بار منجمد کرنے سے گریز کریں۔آر این اے نکالنے کے لیے تازہ ٹشو یا کلچرڈ سیل استعمال کرنے کی کوشش کریں۔
3. ناکافی نمونہ لیسس۔
تجویز: ٹشو کو ہم آہنگ کرتے وقت، اس بات کو یقینی بنائیں کہ ٹشو کافی حد تک ہم آہنگ ہے اور یہ کہ بافتوں کے خلیے RNA کے اخراج کی وضاحت کے لیے کافی تقسیم ہیں۔
4. eluent صحیح طریقے سے شامل نہیں کیا گیا ہے.
تجویز: تصدیق کریں کہ RNase-Free ddH2O کو پیوریفیکیشن کالم میمبرین کے وسط میں ڈراپ وائز میں شامل کیا جاتا ہے۔
5. Buffer RL2 یا Buffer RW2 میں مطلق ایتھنول کا صحیح حجم شامل نہیں کیا گیا تھا۔
تجویز: ہدایات پر عمل کریں، Buffer RL2 اور Buffer RW2 میں مطلق ایتھنول کا صحیح حجم شامل کریں اور کٹ استعمال کرنے سے پہلے اچھی طرح مکس کریں۔
6. ٹشو نمونے کی خوراک مناسب نہیں ہے۔
تجویز: 10-20 ملی گرام ٹشو یا (1-5) × 10 استعمال کریں۔6خلیات فی 500 μl بفر RL1، کیونکہ زیادہ ٹشو استعمال کے نتیجے میں RNA نکالنا کم ہو سکتا ہے۔
7. غلط اخراج کا حجم یا نامکمل اخراج۔
تجویز: پیوریفیکیشن کالم کا اخراج حجم 50-200 μl ہے۔اگر اخراج کا اثر تسلی بخش نہیں ہے تو، پہلے سے گرم RNase-Free ddH شامل کرنے کے بعد کمرے کے درجہ حرارت کی جگہ کے وقت کو بڑھانے کی سفارش کی جاتی ہے۔2O، مثال کے طور پر 5-10 منٹ کے لیے۔
8. بفر RW2 واش کے بعد پیوریفیکیشن کالم میں ایتھنول کی باقیات ہیں۔
تجویز: اگر بفر RW2 دھونے کے بعد ایتھنول کی باقیات موجود ہیں، خالی ٹیوب سینٹرفیوگریشن 1 منٹ کے لیے، خالی ٹیوب سینٹرفیوگریشن آپریشن کا وقت بڑھا کر 2 منٹ کیا جا سکتا ہے، یا پیوریفیکیشن کالم کو کمرے کے درجہ حرارت پر 5 منٹ کے لیے رکھا جا سکتا ہے تاکہ مناسب طریقے سے ایتھنول کی باقیات کو ہٹایا جا سکے۔
پیوریفائیڈ آر این اے انحطاط پذیر ہے۔
پیوریفائیڈ آر این اے کی کوالٹی کا تعلق ایسے عوامل سے ہے جیسے نمونے کی حفاظت، آر نیس کی آلودگی، اور ہیرا پھیری وغیرہ۔
1. ٹشو کے نمونے وقت پر نہیں رکھے جاتے ہیں۔
تجویز: اگر ٹشو کے نمونے یا خلیات جمع کرنے کے بعد بروقت استعمال نہیں کیے جاتے ہیں، تو فوری طور پر -80 °C یا مائع نائٹروجن پر کریوپریزرو کریں۔RNA نکالنے کے لیے، جب بھی ممکن ہو ایک نئے لیے گئے ٹشو یا سیل کا نمونہ استعمال کریں۔
2. ٹشو کے نمونوں کا بار بار منجمد پگھلنا۔
تجویز: ٹشو کے نمونوں کو ذخیرہ کرتے وقت، ان کو محفوظ کرنے کے لیے چھوٹے چھوٹے ٹکڑوں میں کاٹنا بہتر ہے، اور نمونے کے بار بار جمنے سے پگھلنے اور آر این اے کے انحطاط سے بچنے کے لیے استعمال کرتے وقت ان میں سے کسی ایک کو ہٹا دیں۔
3. آپریشن کے دوران RNase متعارف کرایا گیا ہے یا اس نے ڈسپوزایبل دستانے، ماسک وغیرہ نہیں پہنے۔
تجویز: RNA نکالنے کے تجربات الگ الگ RNA ہیرا پھیری والے کمروں میں بہترین طریقے سے کیے جاتے ہیں اور تجربے سے پہلے میز کو صاف کر دیا جاتا ہے۔
تجربے کے دوران ڈسپوزایبل دستانے اور ماسک پہنیں تاکہ RNase کے متعارف ہونے کی وجہ سے RNA کی کمی کو کم کیا جا سکے۔
4. استعمال کے دوران ریجنٹس RNase سے آلودہ ہوتے ہیں۔
تجویز: متعلقہ تجربات کے لیے ایک نئی اینیمل ٹوٹل آر این اے آئسولیشن کٹ سے تبدیل کریں۔
5. آر این اے ہیرا پھیری میں استعمال ہونے والی سینٹری فیوج ٹیوبیں، ٹپس وغیرہ RNase سے آلودہ ہیں۔
تجویز: تصدیق کریں کہ آر این اے نکالنے میں استعمال ہونے والی سینٹری فیوج ٹیوبیں، ٹپس، پائپیٹ وغیرہ سبھی RNase سے پاک ہیں۔
پیوریفائیڈ حاصل شدہ آر این اے بہاو تجربات کو متاثر کرتا ہے۔
آر این اے کو پیوریفیکیشن کالم سے پاک کیا گیا ہے، اگر نمک کے آئنوں، پروٹین کا مواد بہت زیادہ ہے تو بہاو والے تجربے کو متاثر کرے گا، جیسے: ریورس ٹرانسکرپشن،ناردرن بلاٹ وغیرہ۔
1. خارج شدہ آر این اے میں نمک آئن کی باقیات ہوتی ہیں۔
تجویز: تصدیق کریں کہ ایتھنول کا صحیح حجم بفر RW2 میں شامل کیا گیا ہے اور آپریشن کے لیے اشارہ کردہ سینٹری فیوگل رفتار پر 2 پیوریفیکیشن کالم واش انجام دیں۔اگر نمک کے آئن کی کوئی باقیات موجود ہیں، تو صاف کرنے والے کالم کو بفر RW2 پر کمرے کے درجہ حرارت پر 5 منٹ کے لیے چھوڑ دیں اور نمک کی آلودگی کو زیادہ سے زیادہ ہٹانے کے لیے سینٹرفیوگریشن انجام دیں۔
2. خارج شدہ آر این اے میں ایتھنول کی باقیات۔
تجویز: تصدیق کریں کہ بفر RW2 دھونے کے بعد، خالی ٹیوب سینٹرفیوگریشن آپریشن کو آپریشن کے لیے اشارہ کردہ سینٹرفیوگریشن اسپیڈ پر کریں، خالی ٹیوب سینٹرفیوگریشن آپریشن کا وقت بڑھا کر 2 منٹ کریں اگر ایتھنول کی باقیات باقی ہیں، یا اسے کمرے کے درجہ حرارت پر 5 منٹ کے لیے چھوڑ دیں۔ آئیڈیو
