1. 5 سے زیادہ RNAs کے افعال کے نام بتائیں؟
منتقلی آر این اے ٹی آر این اے منتقلی امینو ایسڈ رائبوزوم آر این اے آر آر این اے رائبوزوم میسنجر آر این اے ایم آر این اے پروٹین کی ترکیب کا سانچہ بناتا ہے متضاد جوہری RNA hnRNA بالغ mRNA چھوٹے ایٹمی RNA snRNA کا پیش خیمہ سائز کے سگنل کی شناخت کے جسم کے اجزاء اینٹی سینس RNA anRNA/micRNA جین کے اظہار کو منظم کرتا ہے Ribozyme RNA انزیمیٹک طور پر فعال RNA
2. prokaryotic اور eukaryotic پروموٹرز کے درمیان بنیادی فرق کیا ہے؟
پروکریوٹک ٹی ٹی جی اے سی اے --- TATAAT------ ابتداء سائٹ-35 -10 یوکریوٹک بڑھانے والا---GC ---CAAT----TATAA-5mGpp-Initiation Site-110 -70 -25
3. قدرتی پلاسمیڈ کی مصنوعی تعمیر کے اہم پہلو کیا ہیں؟
قدرتی پلازمیڈ میں اکثر نقائص ہوتے ہیں، اس لیے وہ جینیاتی انجینئرنگ کے لیے کیریئر کے طور پر استعمال کے لیے موزوں نہیں ہیں، اور ان میں ترمیم اور تعمیر ہونی چاہیے: a۔مناسب سلیکشن مارکر جینز شامل کریں، جیسے کہ دو یا زیادہ، جو انتخاب کے لیے استعمال میں آسان ہیں، عام طور پر اینٹی بائیوٹک جین۔بدوبارہ ملاپ کی سہولت کے لیے مناسب انزائم کاٹنے والی جگہوں میں اضافہ یا کمی کریں۔cلمبائی کو کم کریں، غیر ضروری ٹکڑوں کو کاٹ دیں، درآمد کی کارکردگی کو بہتر بنائیں اور لوڈنگ کی صلاحیت میں اضافہ کریں۔dنقل کو تبدیل کریں، تنگ سے ڈھیلے تک، کم کاپیوں سے زیادہ کاپیوں میں۔eجینیاتی انجینئرنگ کی خصوصی ضروریات کے مطابق خصوصی جینیاتی عناصر شامل کریں۔
4. ٹشو مخصوص سی ڈی این اے کی تفریق اسکریننگ کے طریقہ کار کی مثال دیں؟
دو خلیوں کی آبادی تیار کی جاتی ہے، ایک خلیے میں ہدف جین کا اظہار یا انتہائی اظہار کیا جاتا ہے، اور دوسرے خلیے میں ہدف جین کا اظہار یا کم اظہار نہیں کیا جاتا ہے، اور پھر ہدف جین ہائبرڈائزیشن اور موازنہ کے ذریعہ پایا جاتا ہے۔مثال کے طور پر، ٹیومر کی موجودگی اور نشوونما کے دوران، ٹیومر کے خلیے mRNAs کو عام خلیوں سے مختلف اظہار کی سطح کے ساتھ پیش کریں گے۔لہٰذا، ٹیومر سے متعلق جینوں کو تفریق ہائبرڈائزیشن کے ذریعے جانچا جا سکتا ہے۔انڈکشن کا طریقہ ان جینوں کی اسکریننگ کے لیے بھی استعمال کیا جا سکتا ہے جن کا اظہار حوصلہ افزائی کرتا ہے۔
5. ہائبرڈوما سیل لائنوں کی تخلیق اور اسکریننگ؟
Spleen B خلیات + myeloma خلیات، سیل فیوژن کو فروغ دینے کے لیے polyethylene glycol (PEG) شامل کرتے ہیں، اور HAT میڈیم (Hypoxanthine، aminopterin، T پر مشتمل) میں اگائے جانے والے splenic B-myeloma فیوژن سیلز پرورش کو بڑھاتے رہتے ہیں۔سیل فیوژن پر مشتمل ہے: تللی-تیلی فیوژن خلیات: بڑھنے سے قاصر، تلی کے خلیات وٹرو میں مہذب نہیں ہوسکتے ہیں۔ہڈیوں کی ہڈیوں کے فیوژن سیلز: ہائپوکسینتھائن کا استعمال نہیں کر سکتے، لیکن فولیٹ ریڈکٹیس کا استعمال کرتے ہوئے دوسرے راستے سے پیورین کی ترکیب کر سکتے ہیں۔Aminopterin فولیٹ ریڈکٹیس کو روکتا ہے اور اس طرح بڑھ نہیں سکتا۔ہڈی-تیلی فیوژن خلیات: HAT میں بڑھ سکتے ہیں، تلی کے خلیے ہائپوکسینتھائن کا استعمال کر سکتے ہیں، اور ہڈی کے خلیے سیل ڈویژن کا کام فراہم کرتے ہیں۔
6. ڈیوڈوکسی ٹرمینل ٹرمینیشن میتھڈ (سنجر میتھڈ) کے ذریعے ڈی این اے کی بنیادی ساخت کا تعین کرنے کا اصول اور طریقہ کیا ہے؟
اصول یہ ہے کہ ڈی این اے کی توسیع کو ختم کرنے کے لیے نیوکلیوٹائڈ چین ٹرمینیٹر —2،،3،-ڈائیڈوکسینیوکلیوٹائڈ کا استعمال کریں۔چونکہ اس میں 3/5/فاسفوڈیسٹر بانڈز کی تشکیل کے لیے درکار 3-OH کی کمی ہے، ایک بار DNA چین میں شامل ہو جانے کے بعد، DNA چین کو مزید بڑھایا نہیں جا سکتا۔بیس پیئرنگ کے اصول کے مطابق، جب بھی ڈی این اے پولیمریز کو عام طور پر توسیع شدہ ڈی این اے چین میں حصہ لینے کے لیے dNMP کی ضرورت ہوتی ہے، تو دو امکانات ہوتے ہیں، ایک ddNTP میں حصہ لینا، جس کے نتیجے میں deoxynucleotide چین کی توسیع ختم ہوجاتی ہے۔دوسرا dNTP میں حصہ لینا ہے، تاکہ ڈی این اے کا سلسلہ تب تک جاری رہ سکے جب تک کہ اگلا ddNTP شامل نہ ہو جائے۔اس طریقہ کار کے مطابق، ڈی این ٹی پی پر ختم ہونے والے مختلف لمبائیوں کے ڈی این اے کے ٹکڑوں کا ایک گروپ حاصل کیا جا سکتا ہے۔طریقہ یہ ہے کہ بالترتیب ddAMP، ddGMP، ddCMP، اور ddTMP کو چار گروپوں میں تقسیم کیا جائے۔رد عمل کے بعد، پولی کریلامائڈ جیل الیکٹروفورسس سوئمنگ بینڈ کے مطابق ڈی این اے کی ترتیب کو پڑھ سکتا ہے۔
7. نقل پر ایکٹیویٹر پروٹین (CAP) کا مثبت ریگولیشن اثر کیا ہے؟
Cyclic adenylate (cAMP) ریسیپٹر پروٹین CRP (cAMP ریسیپٹر پروٹین)، جو کمپلیکس cAMP اور CRP کے امتزاج سے بنتا ہے اسے CAP (cAMPactivated پروٹین) کہا جاتا ہے۔جب ای کولی کو گلوکوز کی کمی والے درمیانے درجے میں اگایا جاتا ہے، تو CAP کی ترکیب بڑھ جاتی ہے، اور CAP میں لییکٹوز (Lac) جیسے پروموٹرز کو فعال کرنے کا کام ہوتا ہے۔کچھ CRP پر منحصر پروموٹرز میں عام پروموٹرز کے پاس عام -35 ریجن سیکوینس فیچر (TTGACA) کی کمی ہے۔لہذا، RNA پولیمریز کے لیے اس کا پابند ہونا مشکل ہے۔CAP (فنکشن) کی موجودگی: نمایاں طور پر انزائم اور پروموٹر کے پابند مستقل کو بہتر بنا سکتی ہے۔یہ بنیادی طور پر درج ذیل دو پہلوؤں کو ظاہر کرتا ہے: ① CAP پروموٹر کی تشکیل اور انزائم کے ساتھ تعامل کو تبدیل کر کے انزائم مالیکیول کو درست طریقے سے سمت دینے میں مدد کرتا ہے، تاکہ -10 خطے کے ساتھ مل کر -35 خطے کے کام کو بدلنے کا کردار ادا کرے۔②CAP RNA پولیمریز کو DNA میں دیگر سائٹس کے پابند کرنے سے بھی روک سکتا ہے، اس طرح اس کے مخصوص پروموٹر کے پابند ہونے کا امکان بڑھ جاتا ہے۔
8. عام طور پر ایک عام ڈی این اے کی بحالی کے تجربے میں کون سے اقدامات شامل کیے جاتے ہیں؟
aعطیہ کرنے والے جاندار کے ٹارگٹ جین (یا exogenous gen) کو نکالیں، اور enzymatically اسے دوسرے DNA مالیکیول (کلوننگ ویکٹر) سے جوڑیں تاکہ ایک نیا recombinant DNA مالیکیول بنایا جا سکے۔بدوبارہ پیدا کرنے والے ڈی این اے مالیکیول کو وصول کنندہ کے سیل میں منتقل کریں اور اسے وصول کنندہ کے سیل میں نقل اور محفوظ کریں۔اس عمل کو تبدیلی کہتے ہیں۔cاسکرین کریں اور ان وصول کنندگان کی شناخت کریں جنہوں نے دوبارہ پیدا ہونے والے ڈی این اے کو جذب کیا ہے۔dیہ معلوم کرنے کے لیے کہ آیا غیر ملکی امدادی جین کا اظہار کیا گیا ہے، ریکومبینینٹ ڈی این اے پر مشتمل خلیات کو ماس کلچر کرتا ہے۔
9. جین لائبریری کی تعمیر ریکومبیننٹس کی اسکریننگ کے تین طریقے دیے گئے ہیں اور اس عمل کو مختصراً بیان کیا گیا ہے۔
اینٹی بائیوٹک ریزسٹنس اسکریننگ، ریزسٹنس کا داخلی غیر فعال ہونا، بلیو وائٹ اسپاٹ اسکریننگ یا پی سی آر اسکریننگ، ڈیفرینشل اسکریننگ، ڈی این اے پروب زیادہ تر کلوننگ ویکٹر اینٹی بائیوٹک مزاحمتی جین (اینٹی امپیسلن، ٹیٹراسائکلین) رکھتے ہیں۔جب پلاسمڈ کو Escherichia coli میں منتقل کیا جاتا ہے، تو بیکٹیریا مزاحمت حاصل کر لیتے ہیں، اور جن کی منتقلی نہیں ہوتی ان میں مزاحمت نہیں ہوتی۔لیکن یہ فرق نہیں کر سکتا کہ اسے دوبارہ منظم کیا گیا ہے یا نہیں۔دو مزاحمتی جینوں پر مشتمل ویکٹر میں، اگر ایک غیر ملکی ڈی این اے کا ٹکڑا کسی ایک جین میں داخل کیا جاتا ہے اور جین کو غیر فعال کرنے کا سبب بنتا ہے، تو مختلف ادویات پر مشتمل دو پلیٹ کنٹرولز کو مثبت ریکومبیننٹس کی اسکریننگ کے لیے استعمال کیا جا سکتا ہے۔مثال کے طور پر، pUC پلاسمڈ میں LacZ جین (انکوڈنگ β-galactosidase) ہوتا ہے، جو کروموجینک سبسٹریٹ X-gal (5-bromo-4-chloro-3-indole-β-D-galactoside) کو گل کر نیلا بنا سکتا ہے، اس طرح تناؤ نیلا ہو جاتا ہے۔جب غیر ملکی ڈی این اے ڈالا جاتا ہے، تو LacZ جین کا اظہار نہیں کیا جا سکتا، اور تناؤ سفید ہوتا ہے، تاکہ دوبارہ پیدا ہونے والے بیکٹیریا کو اسکرین کیا جا سکے۔
10. ایمبریونک اسٹیم سیلز کے ذریعے ٹرانسجینک جانوروں کے حصول کے بنیادی عمل کی وضاحت کریں؟
ایمبریونک اسٹیم سیل (ES) برانن کی نشوونما کے دوران برانن کے خلیے ہوتے ہیں، جنہیں مصنوعی طور پر مہذب اور پھیلایا جا سکتا ہے اور ان میں خلیات کی دوسری اقسام میں فرق کرنے کا کام ہوتا ہے۔ES خلیات کی ثقافت: بلاسٹوسسٹ کے اندرونی خلیے الگ تھلگ اور مہذب ہوتے ہیں۔جب ES کو فیڈر فری پرت میں کلچر کیا جاتا ہے، تو یہ مختلف فنکشنل سیلز جیسے کہ پٹھوں کے خلیات اور N سیلز میں فرق کرے گا۔جب فبرو بلوسٹس پر مشتمل میڈیم میں کلچر کیا جاتا ہے، تو ES تفریق کا کام برقرار رکھے گا۔ES کو جینیاتی طور پر جوڑ توڑ کیا جا سکتا ہے، اور اس کے تفریق کے فنکشن کو اس کے تفریق کے فنکشن کو متاثر کیے بغیر مربوط کیا جا سکتا ہے، جو بے ترتیب انضمام کا مسئلہ حل کرتا ہے۔برانن اسٹیم سیلز میں خارجی جین متعارف کروائیں، پھر حاملہ چوہوں کے بچہ دانی میں پیوند کاری کریں، پپلوں کی شکل اختیار کریں، اور ہم جنس چوہوں کو حاصل کرنے کے لیے کراس کریں۔