کوئی پروردن سگنل نہیں

1. کٹ میں موجود Taq DNA Polymerase نامناسب اسٹوریج یا کٹ کی میعاد ختم ہونے کی وجہ سے اپنی سرگرمی کھو دیتا ہے۔
سفارش: کٹ کے اسٹوریج کے حالات کی تصدیق کریں؛PCR سسٹم میں Taq DNA Polymerase کی مناسب مقدار دوبارہ شامل کریں یا متعلقہ تجربات کے لیے ایک نئی ریئل ٹائم PCR کٹ خریدیں۔

2.DNA ٹیمپلیٹ میں Taq DNA Polymerase کو روکنے والے بہت سارے ہیں۔
تجویز: ٹیمپلیٹ کو دوبارہ صاف کریں یا استعمال شدہ ٹیمپلیٹ کی مقدار کو کم کریں۔

3. Mg2+ ارتکاز مناسب نہیں ہے۔
تجویز: ہمارے فراہم کردہ 2× اصلی پی سی آر مکس کا Mg2+ ارتکاز 3.5mM ہے۔تاہم، کچھ خاص پرائمر اور ٹیمپلیٹس کے لیے، Mg2+ کا ارتکاز زیادہ ہو سکتا ہے۔لہذا، آپ Mg2+ ارتکاز کو بہتر بنانے کے لیے براہ راست MgCl2 شامل کر سکتے ہیں۔اصلاح کے لیے ہر بار Mg2+ 0.5mM بڑھانے کی سفارش کی جاتی ہے۔

4. پی سی آر ایمپلیفیکیشن کے حالات مناسب نہیں ہیں، اور پرائمر کی ترتیب یا ارتکاز نامناسب ہے۔
تجویز: پرائمر کی ترتیب کی درستگی کی تصدیق کریں اور پرائمر کو خراب نہیں کیا گیا ہے۔اگر ایمپلیفیکیشن سگنل اچھا نہیں ہے تو، اینیلنگ درجہ حرارت کو کم کرنے کی کوشش کریں اور پرائمر کی حراستی کو مناسب طریقے سے ایڈجسٹ کریں۔

5. ٹیمپلیٹ کی مقدار بہت کم یا بہت زیادہ ہے۔
تجویز: ٹیمپلیٹ لائنرائزیشن گریڈینٹ ڈائلیشن کو انجام دیں، اور ریئل ٹائم پی سی آر تجربے کے لیے بہترین پی سی آر اثر کے ساتھ ٹیمپلیٹ کا ارتکاز منتخب کریں۔

NTC میں فلوروسینس کی قدر بہت زیادہ ہے۔

1. آپریشن کے دوران ریجنٹ آلودگی کی وجہ سے.
تجویز: ریئل ٹائم پی سی آر تجربات کے لیے نئے ریجنٹس سے تبدیل کریں۔

2. پی سی آر ری ایکشن سسٹم کی تیاری کے دوران آلودگی ہوئی۔
تجویز: آپریشن کے دوران ضروری حفاظتی اقدامات کریں، جیسے: لیٹیکس کے دستانے پہننا، فلٹر کے ساتھ پائپیٹ کی نوک کا استعمال، وغیرہ۔

3. پرائمر انحطاط پذیر ہیں، اور پرائمرز کی تنزلی غیر مخصوص وسعت کا سبب بنے گی۔
تجویز: SDS-PAGE الیکٹروفورسس کا استعمال اس بات کا پتہ لگانے کے لیے کریں کہ آیا پرائمر خراب ہو گئے ہیں، اور انہیں ریئل ٹائم PCR تجربات کے لیے نئے پرائمر سے تبدیل کریں۔

پرائمر ڈائمر یا غیر مخصوص پروردن

1. Mg2+ ارتکاز مناسب نہیں ہے۔
تجویز: ہمارے فراہم کردہ 2× Real PCR EasyTM مکس کا Mg2+ ارتکاز 3.5 mM ہے۔تاہم، کچھ خاص پرائمر اور ٹیمپلیٹس کے لیے، Mg2+ کا ارتکاز زیادہ ہو سکتا ہے۔لہذا، آپ Mg2+ ارتکاز کو بہتر بنانے کے لیے براہ راست MgCl2 شامل کر سکتے ہیں۔اصلاح کے لیے ہر بار Mg2+ 0.5mM بڑھانے کی سفارش کی جاتی ہے۔

2. پی سی آر اینیلنگ کا درجہ حرارت بہت کم ہے۔
تجویز: ہر بار پی سی آر اینیلنگ درجہ حرارت میں 1 ℃ یا 2 ℃ اضافہ کریں۔

3. پی سی آر پروڈکٹ بہت طویل ہے۔
تجویز: ریئل ٹائم پی سی آر پروڈکٹ کی لمبائی 100-150bp کے درمیان ہونی چاہیے، 500bp سے زیادہ نہیں۔

4. پرائمر انحطاط پذیر ہیں، اور پرائمرز کی تنزلی مخصوص ایمپلیفیکیشن کی ظاہری شکل کا باعث بنے گی۔
تجویز: SDS-PAGE الیکٹروفورسس کا استعمال اس بات کا پتہ لگانے کے لیے کریں کہ آیا پرائمر خراب ہو گئے ہیں، اور انہیں ریئل ٹائم PCR تجربات کے لیے نئے پرائمر سے تبدیل کریں۔

5. پی سی آر سسٹم غلط ہے، یا سسٹم بہت چھوٹا ہے۔
تجویز: پی سی آر ری ایکشن سسٹم بہت چھوٹا ہے جس کی وجہ سے پتہ لگانے کی درستگی کم ہو جائے گی۔ریئل ٹائم پی سی آر تجربہ کو دوبارہ چلانے کے لیے مقداری PCR آلہ کے ذریعے تجویز کردہ رد عمل کا نظام استعمال کرنا بہتر ہے۔

مقداری اقدار کی ناقص تکراری قابلیت

1. آلہ خراب ہو رہا ہے۔
تجویز: آلے کے ہر PCR سوراخ کے درمیان غلطیاں ہو سکتی ہیں، جس کے نتیجے میں درجہ حرارت کے انتظام یا پتہ لگانے کے دوران تولیدی صلاحیت کم ہوتی ہے۔براہ کرم متعلقہ آلے کی ہدایات کے مطابق چیک کریں۔

2. نمونہ کی پاکیزگی اچھی نہیں ہے۔
تجویز: ناپاک نمونے تجربے کی خراب تولیدی صلاحیت کا باعث بنیں گے، جس میں ٹیمپلیٹ اور پرائمر کی پاکیزگی شامل ہے۔ٹیمپلیٹ کو دوبارہ صاف کرنا بہتر ہے، اور SDS-PAGE کے ذریعے پرائمر کو بہترین طریقے سے صاف کیا جاتا ہے۔

3. پی سی آر سسٹم کی تیاری اور اسٹوریج کا وقت بہت طویل ہے۔
تجویز: تیاری کے فوراً بعد پی سی آر کے تجربے کے لیے ریئل ٹائم پی سی آر سسٹم کا استعمال کریں، اور اسے زیادہ دیر تک ایک طرف نہ چھوڑیں۔

4. پی سی آر ایمپلیفیکیشن کے حالات مناسب نہیں ہیں، اور پرائمر کی ترتیب یا ارتکاز نامناسب ہے۔
تجویز: پرائمر کی ترتیب کی درستگی کی تصدیق کریں اور پرائمر کو خراب نہیں کیا گیا ہے۔اگر ایمپلیفیکیشن سگنل اچھا نہیں ہے تو، اینیلنگ درجہ حرارت کو کم کرنے کی کوشش کریں اور پرائمر کی حراستی کو مناسب طریقے سے ایڈجسٹ کریں۔

5. پی سی آر سسٹم غلط ہے، یا سسٹم بہت چھوٹا ہے۔
تجویز: پی سی آر ری ایکشن سسٹم بہت چھوٹا ہے جس کی وجہ سے پتہ لگانے کی درستگی کم ہو جائے گی۔ریئل ٹائم پی سی آر تجربہ کو دوبارہ چلانے کے لیے مقداری PCR آلہ کے ذریعے تجویز کردہ رد عمل کا نظام استعمال کرنا بہتر ہے۔