مسائل کے تجزیہ کے لیے رہنما

The following is an analysis of the problems that might be encountered in the extraction of viral RNA. We wish it would be helpful to your experiment. In addition, for other experimental or technical problems other than operating instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. Contact us if you need at : 028-83361257or E-mail：Tech@foregene.com。

کوئی آر این اے نہیں نکالا جا سکتا ہے یا نیوکلک ایسڈ کی پیداوار کم ہے۔

عام طور پر بہت سے عوامل ہیں جو بحالی کی کارکردگی کو متاثر کرتے ہیں، جیسے: نمونہ آر این اے مواد، آپریشن کا طریقہ، اخراج کا حجم، وغیرہ۔

عام وجوہات کا تجزیہ:

1. آپریشن کے دوران برف کا غسل یا کم درجہ حرارت (4 ° C) سینٹرفیوگریشن۔

تجویز: کمرے کا درجہ حرارت (15-25 ° C) آپریشن، کبھی برف سے نہانا اور کم درجہ حرارت سینٹری فیوج۔

2. بہت لمبے عرصے تک نمونے کا نامناسب ذخیرہ یا نمونہ ذخیرہ۔

تجویز: نمونوں کو -80 ° C پر ذخیرہ کریں یا مائع نائٹروجن میں منجمد کریں، اور بار بار منجمد کرنے سے گریز کریں۔RNA نکالنے کے لیے تازہ جمع کیے گئے نمونے استعمال کرنے کی کوشش کریں۔

3. ناکافی نمونہ لیسس

تجویز: براہ کرم یقینی بنائیں کہ نمونہ اور کام کرنے والے محلول (لینیئر ایکریلامائڈ) کو اچھی طرح سے ملایا گیا ہے اور کمرے کے درجہ حرارت (15-25 ° C) پر 10 منٹ تک انکیوبیٹ کیا گیا ہے۔

4. eluent غلط طریقے سے شامل کیا گیا تھا

تجویز: یقینی بنائیں کہ RNase-Free ddH2O کو پیوریفیکیشن کالم کی جھلی کے بیچ میں شامل کیا گیا ہے۔

5. بفر viRW2 میں اینہائیڈروس ایتھنول کا نامناسب حجم

تجویز: براہ کرم ہدایات پر عمل کریں، بفر viRW2 میں اینہائیڈروس ایتھنول کا صحیح حجم شامل کریں اور کٹ استعمال کرنے سے پہلے انہیں اچھی طرح مکس کریں۔

6. نمونے کا غلط استعمال۔

تجویز: 200µl نمونہ فی 500μl بفر viRL۔ضرورت سے زیادہ نمونے کے حجم کے نتیجے میں RNA نکالنے کی شرح کم ہو جائے گی۔

7. نامکمل اخراج کا حجم یا نامکمل اخراج۔

تجویز: صاف کرنے والے کالم کا ایلیونٹ حجم 30-50μl ہے۔اگر اخراج کا اثر تسلی بخش نہیں ہے تو پہلے سے گرم RNase-Free ddH شامل کرنے کی سفارش کی جاتی ہے۔₂O اور کمرے کے درجہ حرارت پر رکھنے کا وقت بڑھائیں، جیسے 5-10 منٹ

8. بفر viRW2 میں کلی کرنے کے بعد پیوریفیکیشن کالم میں ایتھنول کی باقیات ہوتی ہیں۔

تجویز: اگر بفر viRW2 میں کلی کرنے کے بعد بھی ایتھنول باقی رہتا ہے اور خالی ٹیوب سینٹرفیوگریشن 2 منٹ تک، پیوریفیکیشن کالم کو خالی ٹیوب سینٹرفیوگریشن کے بعد کمرے کے درجہ حرارت پر 5 منٹ کے لیے چھوڑا جا سکتا ہے تاکہ بقیہ ایتھنول کو مکمل طور پر ہٹایا جا سکے۔

صاف شدہ آر این اے مالیکیولز کا انحطاط

پیوریفائیڈ آر این اے کا معیار نمونہ ذخیرہ کرنے، آر نیس کی آلودگی اور آپریشن جیسے عوامل سے متعلق ہے۔

عام وجوہات کا تجزیہ:

1. جمع کیے گئے نمونے وقت پر محفوظ نہیں کیے گئے تھے۔

تجویز: اگر نمونہ جمع کرنے کے بعد وقت پر استعمال نہیں کیا جاتا ہے، تو براہ کرم اسے فوری طور پر -80 ℃ یا مائع نائٹروجن پر اسٹور کریں۔RNA مالیکیولز کو نکالنے کے لیے، جب بھی ممکن ہو تازہ جمع کیے گئے نمونے استعمال کرنے کی کوشش کریں۔

2. جمع کیے گئے نمونے بار بار منجمد اور پگھل رہے تھے۔

تجویز: نمونہ جمع کرنے اور ذخیرہ کرنے کے دوران بار بار جمنے اور پگھلنے سے گریز کریں (ایک سے زیادہ نہیں) ورنہ نیوکلک ایسڈ کی پیداوار کم ہو جائے گی۔

3.RNase کو آپریٹنگ روم میں متعارف کرایا گیا تھا یا کوئی ڈسپوزایبل دستانے، ماسک وغیرہ نہیں پہنے گئے تھے۔

تجویز: آر این اے مالیکیولز کو نکالنے کا تجربہ الگ آر این اے آپریشن روم میں بہترین کارکردگی کا مظاہرہ کیا جاتا ہے، اور تجرباتی میز کو تجربے سے پہلے صاف کیا جاتا ہے۔تجربے کے دوران ڈسپوزایبل دستانے اور ماسک پہنیں تاکہ RNase کے تعارف کی وجہ سے آر این اے کے انحطاط سے بچا جا سکے۔

4. استعمال کے دوران ریجنٹ RNase سے آلودہ ہوتا ہے۔

تجویز: متعلقہ تجربات کے لیے نئی وائرل RNA آئسولیشن کٹ کے ساتھ تبدیل کریں۔

5. سینٹری فیوج ٹیوبوں، پائپیٹ ٹپس وغیرہ کی RNase آلودگی۔ تجویز: اس بات کو یقینی بنائیں کہ سینٹری فیوج ٹیوبیں، پائپیٹ ٹپس، اور پائپیٹ سبھی RNase سے پاک ہیں۔

صاف شدہ آر این اے مالیکیولز نے بہاو کے تجربات کو متاثر کیا۔

پیوریفیکیشن کالم سے پاک ہونے والے آر این اے مالیکیولز بہاوی تجربات کو متاثر کریں گے اگر نمک کے آئن یا پروٹین بہت زیادہ ہوں، جیسے: ریورس ٹرانسکرپشن، ناردرن بلاٹ وغیرہ۔

1. ایلوٹڈ RNA مالیکیولز میں نمک کے آئن باقی ہیں۔

تجویز: یقینی بنائیں کہ اینہائیڈروس ایتھنول کا صحیح حجم بفر viRW2 میں شامل کیا گیا ہے، اور آپریٹنگ ہدایات پر درست سینٹرفیوگریشن اسپیڈ کے مطابق پیوریفیکیشن کالم کو دو بار دھوئیں؛ اگر اب بھی نمک کے آئن باقی ہیں، تو آپ بفر viRW2 کو پیوریفیکیشن کالم میں شامل کر سکتے ہیں، اور اسے کمرے کے درجہ حرارت پر 5 منٹ تک چھوڑ دیں۔پھر سب سے زیادہ حد تک نمک کے آئنوں کی آلودگی کو دور کرنے کے لیے سینٹرفیوگریشن انجام دیں۔

2. ایلوٹڈ آر این اے مالیکیولز میں ایتھنول باقی ہیں۔

تجویز: ایک بار اس بات کی تصدیق کرنے کے بعد کہ بفر viRW2 کے ذریعہ پیوریفیکیشن کالموں کو کلی کیا گیا ہے، آپریٹنگ ہدایات پر سینٹرفیوگل رفتار کے مطابق خالی ٹیوب سینٹرفیوگریشن انجام دیں۔اگر اب بھی ایتھنول باقی ہے، تو اسے خالی ٹیوب سینٹرفیوگریشن کے بعد کمرے کے درجہ حرارت پر 5 منٹ کے لیے چھوڑا جا سکتا ہے تاکہ بقیہ ایتھنول کو زیادہ سے زیادہ حد تک نکالا جا سکے۔

ہدایت نامہ:

وائرل آر این اے آئسولیشن کٹ انسٹرکشن مینول