بکل سویب / ایف ٹی اے کارڈ ڈی این اے آئسولیشن کٹ جینومک ڈی این اے نکالنے یا بکل سویبس سے پیوریفیکشن کٹ
کٹ کی تفصیل:
buccal swab/FTA کارڈ کے نمونوں سے اعلیٰ معیار کے جینومک DNA کو جلدی سے صاف کریں۔
◮RNase آلودگی نہیں:کٹ کے ذریعے فراہم کردہ DNA-Only کالم تجربے کے دوران RNase کو شامل کیے بغیر جینومک DNA سے RNA کو ہٹانا ممکن بناتا ہے، جس سے لیبارٹری کو خارجی RNase سے آلودہ ہونے سے روکا جاتا ہے۔
◮تیز رفتار:فارجین پروٹیز میں اسی طرح کے پروٹیز سے زیادہ سرگرمی ہوتی ہے، اور ٹشو کے نمونوں کو جلدی ہضم کر لیتا ہے۔آپریشن آسان ہے، اور جینومک ڈی این اے نکالنے کا آپریشن 20-80 منٹ میں مکمل کیا جا سکتا ہے۔
◮آسان:سینٹرفیوگریشن کمرے کے درجہ حرارت پر کی جاتی ہے، اور 4°C کم درجہ حرارت والے سینٹرفیوگریشن یا DNA کی ایتھنول ورن کی ضرورت نہیں ہے۔
◮حفاظت:کوئی نامیاتی ری ایجنٹ نکالنے کی ضرورت نہیں ہے۔
◮اعلی معیار:نکالے گئے جینومک ڈی این اے میں بڑے ٹکڑے ہیں، کوئی آر این اے نہیں، کوئی آر نیس نہیں، اور انتہائی کم آئن مواد ہے، جو مختلف تجربات کی ضروریات کو پورا کر سکتا ہے۔
◮مائیکرو الیشن سسٹم:یہ جینومک ڈی این اے کے ارتکاز کو بڑھا سکتا ہے، جو بہاو کا پتہ لگانے یا تجربے کے لیے آسان ہے۔
تفصیل
یہ کٹ بکل سویبس اور ایف ٹی اے کارڈ (خون کے دھبوں) سے زیادہ ارتکاز والے جینومک ڈی این اے حاصل کرنے کا ایک موثر اور تیز طریقہ فراہم کرتی ہے۔ہماری کمپنی کا استعمال کرتے ہوئے's منفرد ڈی این اے صرف سلیکا میمبرین اسپن کالم اور فارمولہ، فارجین پروٹیز کے ساتھ مل کر، اعلیٰ ارتکاز، اعلیٰ معیار کا جینومک ڈی این اے 80 منٹ میں نکالا جا سکتا ہے۔خاص طور پر ڈیزائن کیا گیا چھوٹا پیوریفیکیشن کالم جینومک ڈی این اے کو جوڑتا ہے، اور ڈی این اے کو تھوڑی مقدار کے ساتھ الگ کیا جا سکتا ہے (15μl) حاصل شدہ جینومک ڈی این اے کے ارتکاز کو بڑھانے کے لیے الیوشن سسٹم، جو بہاو کا پتہ لگانے یا تجربے کے لیے آسان ہے۔کٹ ایک وقت میں ایک یا ایک سے زیادہ نمونوں پر کارروائی کر سکتی ہے، اور صاف کرنے کے عمل میں نامیاتی مادوں جیسے فینول، کلوروفارم، اور وقت استعمال کرنے والے آئسوپروپانول یا ایتھنول کو نکالنے کی ضرورت نہیں ہے، اور آپریشن آسان اور وقت کی بچت ہے۔
وضاحتیں
50 تیاریاں
کٹ کے اجزاء
| بفر ST1 |
| بفر ST2 |
| لکیری ایکریلامائڈ |
| بفر پی ڈبلیو |
| بفر ڈبلیو بی |
| بفر ای بی |
| فارجین پروٹیز |
| صرف ڈی این اے کالم |
| ہدایات |
خصوصیات اور فوائد
RNase آلودگی نہیں: کٹ کے ذریعہ فراہم کردہ DNA-Only کالم تجربہ کے دوران RNase کو شامل کیے بغیر جینومک DNA سے RNA کو ہٹانا ممکن بناتا ہے، لیبارٹری کو خارجی RNase سے آلودہ ہونے سے بچاتا ہے۔
تیز رفتار: فارجین پروٹیز میں اسی طرح کے پروٹیز کے مقابلے زیادہ سرگرمی ہوتی ہے، نمونوں کو جلدی ہضم کر لیتی ہے۔سادہ آپریشن.
-آسان: سینٹرفیوگریشن کمرے کے درجہ حرارت پر کی جاتی ہے، اور 4°C کم درجہ حرارت والے سینٹرفیوگریشن یا DNA کی ایتھنول ترسیب کی ضرورت نہیں ہے۔
- حفاظت: کوئی نامیاتی ریجنٹ نکالنے کی ضرورت نہیں ہے۔
-اعلیٰ معیار: نکالے گئے جینومک ڈی این اے میں بڑے ٹکڑے ہوتے ہیں، کوئی RNA، کوئی RNase نہیں، اور انتہائی کم آئن مواد ہوتا ہے، جو مختلف تجربات کی ضروریات کو پورا کر سکتا ہے۔
مائیکرو الیشن سسٹم: یہ جینومک ڈی این اے کے ارتکاز کو بڑھا سکتا ہے، جو بہاو کی کھوج یا تجربے کے لیے آسان ہے۔
کٹ کی درخواست
یہ مندرجہ ذیل نمونوں سے جینومک ڈی این اے کو صاف کرنے کے لیے موزوں ہے: بکل سویبس، ایف ٹی اے کارڈ (خون کے داغ)۔
اسٹوریج اور شیلف زندگی
-اس کٹ کو کمرے کے درجہ حرارت (15-25 ° C) پر خشک حالات میں 12 ماہ تک ذخیرہ کیا جا سکتا ہے؛اگر اسے لمبے عرصے تک ذخیرہ کرنے کی ضرورت ہو تو اسے 2-8 ° C پر ذخیرہ کیا جا سکتا ہے۔
نوٹ: اگر کم درجہ حرارت پر ذخیرہ کیا جاتا ہے تو، محلول بارش کا شکار ہوتا ہے۔استعمال کرنے سے پہلے، محلول کو کمرے کے درجہ حرارت پر کچھ وقت کے لیے کٹ میں رکھنا یقینی بنائیں۔اگر ضروری ہو تو، اسے 10 منٹ کے لیے 37 ° C کے پانی کے غسل میں پہلے سے گرم کریں تاکہ ورن کو تحلیل کیا جا سکے، اور استعمال سے پہلے اسے مکس کریں۔
-فورجین پروٹیز سلوشن کا ایک انوکھا فارمولا ہے، جو کمرے کے درجہ حرارت پر طویل عرصے تک (3 ماہ) ذخیرہ کرنے پر فعال ہوتا ہے؛اس کی سرگرمی اور استحکام بہتر ہوگا جب اسے 4°C پر ذخیرہ کیا جائے، اس لیے اسے 4°C پر ذخیرہ کرنے کی سفارش کی جاتی ہے، یاد رکھیں کہ اسے -20°C پر نہ رکھیں۔
طہارت کا کالم بھرا ہوا ہے۔
اس کٹ میں، جینومک ڈی این اے نکالنے کے آپریشن میں، پیوریفیکیشن کالم کو سینٹرفیوگریشن سٹیپ کے بغیر نمونے کے اینزائیمیٹک لیسز مکسچر پر براہ راست جذب کیا جاتا ہے، اور پیوریفیکیشن کالم نامکمل انزائمائزیشن اور نمونے کی زیادہ چپکنے کی وجہ سے بلاک ہو سکتا ہے۔
مندرجہ ذیل ممکنہ وجوہات درج ذیل ہیں۔
1. ٹشو کے نمونوں کا نامکمل انزیمیٹک ہاضمہ۔
تجویز: Foregene Protease کے نمونے کی پروسیسنگ کے وقت کو مناسب طریقے سے بڑھایا جا سکتا ہے یا 5 منٹ کے لیے 12,000 rpm (~ 13,400 × g) پر سینٹرفیوگریشن کے بعد سپرنٹنٹ لیا جا سکتا ہے۔
2. ٹشو کے نمونوں یا بڑے ٹشوز کا زیادہ استعمال۔
تجویز: نمونے میں 1 بکل جھاڑو سے زیادہ نہ ہونا بہتر ہے۔اگر نمونہ بہت بڑا ہے تو اس کے مطابق بفر ایس ٹی 1، فورجین پروٹیز، بفر ایس ٹی 2 کی خوراک میں اضافہ کریں۔
3. نمونہ viscosity بہت زیادہ ہے.
تجویز: جینومک ڈی این اے نکالنے سے پہلے نمونوں کو 10 ایم ایم Tris-HCl سے پتلا کیا جا سکتا ہے۔
4. خون کے کارڈ کے ٹکڑے چوس لیے گئے ہیں۔
تجویز: بلڈ اسپاٹ (FTA کارڈ) جینومک نکالنے کے مرحلہ 6 کے عارضی سینٹرفیوگریشن ٹائم کو مناسب طریقے سے بڑھایا جا سکتا ہے۔
کم پیداوار یا کوئی ڈی این اے نہیں۔
اکثر مختلف عوامل ہوتے ہیں جو جینومک ڈی این اے کی پیداوار کو متاثر کرتے ہیں، بشمول نمونے کی اصلیت، نمونہ ذخیرہ کرنے کے حالات، نمونے کی تیاری، ہیرا پھیری وغیرہ۔
نکالنے کے دوران جینومک ڈی این اے حاصل نہیں کیا جا سکتا
ممکنہ وجوہات درج ذیل ہیں:
1. نمونوں کا غلط تحفظ یا زیادہ دیر تک ذخیرہ کرنا جینومک ڈی این اے کے انحطاط کا باعث بنتا ہے۔
تجویز: زبانی جھاڑیوں کو ترجیحی طور پر تازہ نمونہ لیا جانا چاہئے، اور جینومک ڈی این اے نکالنے کے آپریشن کے لیے محفوظ جھاڑو استعمال کرنا مناسب نہیں ہے۔خون کے داغ کے نمونے اس بات کو یقینی بنائیں کہ معیار کوالیفائیڈ ہے اور ذخیرہ کرنے کا وقت زیادہ طویل نہیں ہونا چاہیے۔
2. ٹشو کے بہت کم استعمال کے نتیجے میں متعلقہ جینومک ڈی این اے کا اخراج نہیں ہو سکتا۔
تجویز: آپریشن گائیڈ میں بکل سویب کے نمونے لینے کی ہدایات پر عمل کریں، اور جتنی بار ممکن ہو صاف کریں تاکہ جینومک ڈی این اے نکالنے کے لیے زبانی جھاڑو کے ساتھ کافی خلیے منسلک ہو سکیں؛خون کی جگہ کے نمونے نکالنے کے لیے، خون کے دھبے کاٹنے کے علاقے کو مناسب طور پر بڑھایا جا سکتا ہے۔
3. Foregene Protease کو غلط طریقے سے محفوظ کیا جاتا ہے، جس کے نتیجے میں اس کی سرگرمی میں کمی یا غیر فعال ہو جاتی ہے۔
تجویز: فورجین پروٹیز کی سٹوریج کی شرائط کی تصدیق کریں یا انزیمیٹک رد عمل کے لیے اسے نئے فورجین پروٹیز سے بدل دیں۔
4. کٹ کا نامناسب تحفظ یا ذخیرہ کرنے کا وقت بہت طویل ہے، جس کے نتیجے میں کٹ میں کچھ اجزاء خراب ہو جاتے ہیں۔
تجویز: متعلقہ طریقہ کار کے لیے ایک نئی Buccal swab DNA آئسولیشن کٹ خریدیں۔
5. بفر ڈبلیو بی مطلق ایتھنول شامل نہیں کرتا ہے۔
تجویز: تصدیق کریں کہ بفر ڈبلیو بی مطلق ایتھنول کا صحیح حجم شامل کرتا ہے۔
6. سلیکون فلم میں ایلیونٹ کو صحیح طریقے سے شامل نہیں کیا گیا ہے۔
تجویز: سلیکون جھلی کے وسط میں 65 °C پہلے سے گرم ایلیونٹ کے قطرے ڈالیں اور اخراج کی کارکردگی کو بڑھانے کے لیے کمرے کے درجہ حرارت پر 5 منٹ کے لیے چھوڑ دیں۔
کم پیداوار والا جینومک ڈی این اے الگ تھلگ
مندرجہ ذیل ممکنہ وجوہات درج ذیل ہیں۔
1. نمونوں کا غلط تحفظ یا زیادہ دیر تک ذخیرہ کرنا جینومک ڈی این اے کے انحطاط کا باعث بنتا ہے۔
تجویز: زبانی جھاڑیوں کو ترجیحی طور پر تازہ نمونہ لیا جاتا ہے، اور محفوظ شدہ جھاڑیوں کو جینومک ڈی این اے نکالنے کے لیے استعمال نہیں کیا جانا چاہیے۔
2. اگر ٹشو کے نمونے کی مقدار بہت کم ہے، تو نکالا گیا جینومک ڈی این اے مواد کم ہوگا۔
تجویز: آپریٹنگ گائیڈ میں زبانی جھاڑو کے نمونے لینے کی ہدایات پر عمل کریں، جتنی بار ممکن ہو مسح کریں تاکہ جینومک ڈی این اے نکالنے کے لیے کافی خلیے زبانی جھاڑو سے منسلک ہو سکیں۔
3. Foregene Protease کو غلط طریقے سے محفوظ کیا جاتا ہے، جس کے نتیجے میں اس کی سرگرمی میں کمی یا غیر فعال ہو جاتی ہے۔
تجویز: فورجین پروٹیز کی سٹوریج کی شرائط کی تصدیق کریں یا انزیمیٹک رد عمل کے لیے اسے نئے فورجین پروٹیز سے بدل دیں۔
4. Eluent مسائل.
سفارش: elution کے لیے Buffer EB استعمال کریں۔اگر ddH استعمال کر رہے ہیں۔2O یا دیگر ایلیونٹ، تصدیق کریں کہ ایلیویٹ کا پی ایچ 7.0-8.5 کے درمیان ہے۔
5. ایلیویٹ کو ڈراپ وائز میں صحیح طریقے سے شامل نہیں کیا گیا ہے۔
تجویز: سلیکون جھلی کے بیچ میں ایلیونٹ کے قطرے ڈالیں اور 5 منٹ کے لیے کمرے کے درجہ حرارت پر چھوڑ دیں تاکہ اخراج کی کارکردگی میں اضافہ ہو۔
6. ایلیوشن مائع بہت کم جمع ہوتا ہے۔
تجویز: جینومک ڈی این اے کے اخراج کے لیے ایلیونٹ استعمال کریں جیسا کہ ہدایات میں درکار ہے، کم از کم 15 μl سے کم نہ ہو۔
جینومک ڈی این اے کی کم پاکیزگی الگ تھلگ
کم جینومک ڈی این اے کی پاکیزگی بہاؤ کے تجربات کے ناکامی یا غیر اطمینان بخش نتائج کا باعث بن سکتی ہے، جیسے: انزائمز کو کھلا نہیں کاٹا جا سکتا، PCR دلچسپی کا جین کا ٹکڑا حاصل نہیں کر سکتا، وغیرہ۔
ممکنہ وجوہات درج ذیل ہیں:
1. ہیٹروپروٹین آلودگی، آر این اے آلودگی۔
تجزیہ: پیوریفیکیشن کالم کو بفر پی ڈبلیو کا استعمال کرتے ہوئے نہیں دھویا گیا تھا۔بفر پی ڈبلیو واش پیوریفیکیشن کالم کو درست سینٹرفیوگل رفتار کا استعمال کرتے ہوئے نہیں دھویا گیا تھا۔
تجویز: ایتھنول شامل کرنے سے پہلے اس بات کو یقینی بنائیں کہ سپرنٹنٹ میں کوئی بارش نہیں ہے۔ہدایات کے مطابق صاف کرنے کے کالم کو دھونا یقینی بنائیں، اور اس قدم کو چھوڑا نہیں جا سکتا۔
2. نجاست آئن آلودگی۔
تجزیہ: بفر ڈبلیو بی واش پیوریفیکیشن کالم کو صرف ایک بار چھوڑ دیا گیا یا دھویا گیا، جس کے نتیجے میں بقایا آئنک آلودگی پیدا ہوئی۔
تجویز: بفر ڈبلیو بی کو 2 بار دھونا یقینی بنائیں تاکہ باقی آئنوں کو زیادہ سے زیادہ ہٹانے کی ہدایت کی جائے۔
3. آر این اے انزائم آلودگی۔
تجزیہ: غیر ملکی RNases کو بفر میں شامل کیا گیا تھا۔Buffer PW واش آپریشن غلط تھا، جس کے نتیجے میں RNase باقیات نکلتے ہیں، جو نیچے دھارے والے RNA تجرباتی آپریشنز کو متاثر کرتے ہیں، جیسے وٹرو ٹرانسکرپشن میں۔
تجویز: فارجین سیریز نیوکلک ایسڈ آئسولیشن کٹس RNase کے اضافی اضافے کے بغیر RNA کو ہٹا سکتی ہیں، اس طرح buccal Swab/FTA کارڈ DNA Isolation Kit کو RNase شامل کرنے کی ضرورت نہیں ہے۔Buffer PW واشنگ پیوریفیکیشن کالم کی ہدایات پر عمل کرنا یقینی بنائیں، اور اس قدم کو چھوڑا نہیں جا سکتا۔
4. ایتھنول کی باقیات۔
تجزیہ: بفر ڈبلیو بی نے صاف کرنے والے کالم کو دھونے کے بعد خالی ٹیوب سینٹرفیوگریشن نہیں کی۔
تجویز: ہدایات کے مطابق صحیح خالی ٹیوب سینٹرفیوگریشن آپریشن کریں۔
5. دیگر نجاست آلودگی۔
تجزیہ: محفوظ شدہ نمونے یا خصوصی نمونے پہلے سے تیار نہیں کیے جاتے ہیں۔
تجویز: ہدایت کے مطابق نمونے کو اچھی طرح سے تیار کریں۔
