گلو کی بازیابی کو بہتر بنانے کے لئے نکات

1. الیکٹروفورسس کے دوران نمونے کے بوجھ میں اضافہ کریں۔

2. تازہ تیار شدہ الیکٹروفورسس بفر استعمال کریں۔

3. گلو کاٹتے وقت، گلو کاٹنے کے حجم کو کم کرنے کے لیے صرف سٹرپس کے ساتھ گلو کو کاٹنے کی کوشش کریں: چند مقاصد کے ٹکڑوں کے ساتھ گلو کی ضرورت نہیں ہے، ورنہ یہ بحالی کی شرح کو متاثر کرے گا۔

4. گلو کے دو یا دو سے زیادہ ٹکڑوں کو پگھلنے کے بعد، ایک ٹیوب کا استعمال کریں چاہے حجم کتنا ہی بڑا ہو اور اسے اسی کالم میں منتقل کریں۔

5. سول میں جو محلول شامل کیا جاتا ہے وہ تھوڑا زیادہ ہو سکتا ہے، جو ڈی این اے کو جھلی کے ساتھ باندھنے کے لیے زیادہ سازگار ہے، لیکن عام طور پر 750ul سے زیادہ نہیں ہوتا ہے۔

6. جیل کی بحالی کی کلید ڈی این اے کو کالم میں نمک کے ارتکاز، تیزابیت (چارج) اور محلول کی ہائیڈروفوبیسیٹی کے ذریعے کالم سے جوڑنا ہے۔لہذا، اگر الیکٹروفورسس بفر کا پی ایچ بہت زیادہ ہے، تو 10ul (pH 5.0, 3mol/L NaAC) کو سول میں شامل کیا جا سکتا ہے۔جھلی پر ڈی این اے مالیکیولز کو بہتر طریقے سے روکنے کے لیے، گلو کو تحلیل کرنے کے بعد 30% isopropanol کو مائع میں گرم کرنے کے لیے شامل کیا جا سکتا ہے۔

7. ایلیونٹ شامل کرنے سے پہلے، ایتھنول کو مکمل طور پر بخارات بنانے کے لیے کالم کو کمرے کے درجہ حرارت پر چند منٹ (تقریباً 10 منٹ) کے لیے چھوڑ دیں۔

8. آخر میں، ریکوری والیوم کو کم سے کم کرنے کے لیے کم ایلیونٹ شامل کریں۔عام طور پر، elution کے لیے 30-50μl ایلیوینٹ استعمال کیا جاتا ہے (بہت کم نہیں، ورنہ یہ جھلی کو گیلا نہیں کر سکے گا، جو کہ اخراج کے لیے موزوں نہیں ہے)؛elution کی بوندیں جھلی کے بیچ میں ہوتی ہیں، تاکہ جھلی سے جڑے ہوئے DNA کو مکمل طور پر ختم کیا جا سکے۔

9. ایلیونٹ شامل کرنے کے بعد، اسے 55 ڈگری کے پانی کے غسل میں 5 منٹ کے لیے نکالا جا سکتا ہے یا 50 ڈگری کے پانی کے غسل میں 10 منٹ سے زیادہ کے لیے رکھا جا سکتا ہے، یا رات بھر 4 ڈگری پر پیرا فلم کے ساتھ سیل کیا جا سکتا ہے، اور پھر اگلے دن بحالی کے لیے سینٹری فیوج کیا جا سکتا ہے، اثر اچھا ہوتا ہے۔

10. سینٹرفیوجڈ ایلیویٹ کو واپس جذب کرنے والے کالم میں شامل کریں اور دوبارہ سینٹرفیوج کریں۔

PCR مصنوعات کی وصولی کے لیے تفصیلی طریقے اور طریقہ کار

1. عام ربڑ کی ری سائیکلنگ

اگر آپ گوند کو بحال کرنا چاہتے ہیں، تو ایک کٹ استعمال کرنا بہتر ہے، جو کہ آسان ہو اور اس کی وصولی کی شرح قدرے زیادہ ہو۔اگر آپ کو واقعی اسے دستی طور پر بحال کرنے کی ضرورت ہے، تو آپ گلو کو کاٹنے کے بعد TE کے حجم سے 3 گنا اضافہ کر سکتے ہیں۔پانی کے غسل میں پگھلنے کے بعد، فینول، فینول/کلوروفارم کو صاف طور پر نکالا جاتا ہے، اور ایتھنول کو تیز کیا جاتا ہے۔یہی ہے.

2. کم پگھلنے والے نقطہ جیلوں سے ڈی این اے کی بحالی

ڈی این اے کے ٹکڑوں کو صاف کرنے کے لیے جیل کے حجم کے برابر TE (10 mmol/l Tris-HCl pH8.0، 0.1 mmol/l EDTA) شامل کریں، اور جیل کو مکمل طور پر تحلیل کرنے کے لیے 5 منٹ کے لیے 65°C پانی کے غسل میں رکھیں۔

اسے کمرے کے درجہ حرارت پر لانے کے بعد، فینول کی مساوی مقدار (TE کے ساتھ سیر شدہ، TE کو اوپری تہہ میں بند کر دیا گیا، اور فینول کی نچلی تہہ کو ہٹا دیا گیا) شامل کیا گیا، اور مکسچر کو آہستہ سے ملایا گیا (کوئی اختلاط کی ضرورت نہیں)، اور 3 منٹ کے لیے 12,000 rpm پر سینٹرفیوج کیا گیا۔1-2 بار دہرائیں۔

سپرناٹینٹ لیں، 3mol/L سوڈیم ایسیٹیٹ (pH 5.2) کا 0.1 حجم اور ایتھنول کی بارش کو انجام دینے کے لیے مطلق ایتھنول کا 2.5 گنا حجم شامل کریں۔پیوریفائیڈ ڈی این اے کو مناسب مقدار میں TE کے ساتھ تحلیل کریں، مواد کی پیمائش کریں، اور استعمال کے لیے تیاری کریں (اسے ہدف جین کی ساخت کے تجزیہ، تحقیقات کی تیاری وغیرہ کے لیے استعمال کیا جا سکتا ہے)۔

3. اچھی پروردن کی خصوصیت کے ساتھ پی سی آر کی بحالی

اگر پی سی آر ایمپلیفیکیشن کی خاصیت اچھی ہے، تو یہ پی سی آر پروڈکٹ کی صرف ایک سادہ صاف اور بازیافت ہے۔آپ PCR پروڈکٹ میں 50ug/ml proteinase K شامل کر سکتے ہیں، 1h کے لیے 37 ڈگری، فینول/کلوروفارم کے ساتھ ایک بار نکال سکتے ہیں، کلوروفارم کے ساتھ ایک بار نکال سکتے ہیں، اور سپرنٹنٹ کا 0.1 والیوم شامل کر سکتے ہیں۔سوڈیم ایسیٹیٹ 2.5 والیوم مطلق ایتھنول کے ساتھ ورن سے برآمد ہوا۔

متعلقہ مصنوعات:

https://www.foreivd.com/pcr-purification-kit-2-product/

https://www.foreivd.com/blood-superdirecttm-pcr-kit-edta-product/