تجربہ کار اہلکاروں کے رویے کو معیاری بنانے کے لیے PCR تجرباتی SOP قائم کریں۔
تجربہ کار آپریٹنگ طریقہ کار کی سختی سے پابندی کرتا ہے، اور پی سی آر آلودگی کو کم کرتا ہے جو انسانی عوامل کی وجہ سے ہو سکتا ہے یا آلودگی کو ہونے سے روکتا ہے۔اس کے علاوہ، تجربہ کار کے پاس متعلقہ پیشہ ورانہ علم اور مہارتیں ہونی چاہئیں، بشمول متعلقہ آلات کو چلانے میں مہارت، کام کے پورے عمل کو واضح کرنا، آلودگی کے علاج کے طریقوں اور لیبارٹری کوالٹی کنٹرول کے طریقوں میں مہارت حاصل کرنا، اور ٹیسٹ کے نتائج کی صحیح تشریح کرنے کے قابل ہونا۔
معیاری پی سی آر لیبارٹری قائم کی جائے۔
پی سی آر لیبارٹری کو اصولی طور پر چار شعبوں میں تقسیم کیا گیا ہے، یعنی ریجنٹ کی تیاری کا علاقہ، نمونہ پروسیسنگ ایریا، ایمپلیفیکیشن ایریا، اور ایمپلیفیکیشن پروڈکٹ تجزیہ کا علاقہ۔پہلے دو علاقے پری ایمپلیفیکیشن کے علاقے ہیں، اور آخری دو علاقے پوسٹ ایمپلیفیکیشن کے علاقے ہیں۔پری ایمپلیفیکیشن زون اور پوسٹ ایمپلیفیکیشن زون کو سختی سے الگ کیا جانا چاہئے۔تجرباتی مواد، ری ایجنٹس، ریکارڈنگ پیپر، قلم، صفائی کا مواد، وغیرہ، صرف پری ایمپلیفیکیشن ایریا سے پوسٹ ایمپلیفیکیشن ایریا میں بہہ سکتے ہیں، یعنی ریجنٹ کی تیاری کے علاقے → نمونہ پروسیسنگ ایریا → ایمپلیفیکیشن ایریا → ایمپلیفیکیشن پروڈکٹ تجزیہ ایریا، اور پیچھے کی طرف نہیں بہنا چاہیے۔لیبارٹری میں ہوا کا بہاؤ بھی پری ایمپلیفیکیشن ایریا سے پوسٹ ایمپلیفیکیشن ایریا میں بہنا چاہیے، اور پیچھے کی طرف نہیں بہنا چاہیے۔مثالی پی سی آر لیبارٹری ڈیزائن ذیل میں دکھایا گیا ہے:
شکل A: بفر روم میں منفی دباؤ کے ساتھ مثالی PCR لیبارٹری سیٹ اپ موڈ
شکل B: بفر روم میں مثبت دباؤ کے ساتھ مثالی PCR لیبارٹری سیٹ اپ موڈ
پی سی آر لیبارٹری سیٹ اپ ڈایاگرام جو شکل A اور Figure B میں دیا گیا ہے زیادہ مثالی سیٹ اپ موڈ ہونا چاہیے، اور حالات کے ساتھ لیبارٹری ڈیزائن کے لیے اس موڈ کا حوالہ دے سکتی ہے۔عام لیبارٹریوں کے لیے، یہ تجویز کیا جاتا ہے کہ پی سی آر ایمپلیفیکیشن ایریا اور پروڈکٹ کے تجزیہ کے علاقے کو الگ کیا جا سکتا ہے، اور سیمپل کی تیاری کے علاقے اور پی سی آر ایمپلیفیکیشن ایریا میں کور کے کھلنے کو جتنا ممکن ہو کم کیا جائے۔یاد رکھیں: مصنوعات کے تجزیہ کے علاقے میں مصنوعات اور تجرباتی سامان کو نمونے کی تیاری کے علاقے اور پی سی آر ایمپلیفیکیشن ایریا میں لے جانے کی سختی سے ممانعت ہے۔
اگر لیبارٹری صرف پی سی آر کا پتہ لگانے اور شناخت کرتی ہے تو، روایتی پی سی آر کے بجائے فلوروسینٹ مقداری پی سی آر استعمال کرنے کی سفارش کی جاتی ہے۔
فلوروسینس مقداری PCR کا پتہ لگانے کے نتائج کو فلوروسینس سگنلز کے ذریعے جمع اور تجزیہ کیا جا سکتا ہے، اس لیے رد عمل کے بعد الیکٹروفورسس کے لیے ڈھکن کھولنے کی ضرورت نہیں ہے، جو کہ پی سی آر پروڈکٹ کی آلودگی سے بچتا ہے جو کہ ایروسول بنانے کے لیے ری ایکشن پراڈکٹس کے رساو کی وجہ سے ہوتا ہے۔اگر آپ جیل الیکٹروفورسس کے لوڈنگ مرحلے کے دوران ٹوپی کھولنے کی تعداد میں اضافہ کرتے ہیں تو، ایروسول آلودگی ہونے کا امکان ہے۔یہ سفارش کی جاتی ہے کہ مقداری پی سی آر کے اطلاق کو فروغ دیا جائے اور آہستہ آہستہ کوالٹیٹیو پی سی آر کو تبدیل کیا جائے۔
UNG اینٹی پی سی آر مصنوعات کی آلودگی کا نظام پی سی آر کے رد عمل کے لیے استعمال کیا جاتا ہے۔
سسٹم ڈی ٹی ٹی پی کی بجائے ڈی یو ٹی پی استعمال کرتا ہے۔پی سی آر کے رد عمل کے بعد، تمام پی سی آر پروڈکٹس (ڈی این اے کے ٹکڑے) ڈی یو ٹی پی کے ساتھ شامل کیے جاتے ہیں۔PCR ردعمل کے اگلے دور میں، سسٹم میں شامل UNG انزائم PCR سے 5 منٹ پہلے 37°C پر انکیوبیٹ کیا جاتا ہے، جو کہ خاص طور پر DUTP پر مشتمل تمام DNA کے ٹکڑوں کو کم کر سکتا ہے، اور پھر PCR ردعمل کو انجام دیتا ہے۔یہ پی سی آر مصنوعات کی وجہ سے ایروسول آلودگی کو مکمل طور پر دور کر سکتا ہے۔اثر نیچے دی گئی تصویر میں دکھایا گیا ہے۔
نوٹ: براہ راست پی سی آر سیریز کے لیے، آپ فارجین کے اینٹی پی سی آر مصنوعات کی آلودگی کے نظام کی سیریز کی مصنوعات کا انتخاب کر سکتے ہیں۔تجویز کریں۔
بڑے پیمانے پر جین ٹائپنگ ٹیسٹنگ کرنے والی لیبارٹریوں کے لیے، معقول لیبارٹریوں کی تعمیر کے علاوہ ری ایجنٹس کی جانچ کے لیے UNG اینٹی پی سی آر پروڈکٹ آلودگی کے نظام کو استعمال کرنے کی سختی سے سفارش کی جاتی ہے۔
یاد دہانی: اس سسٹم کا استعمال پی سی آر پروڈکٹ کی آلودگی کو دور نہیں کر سکتا جو پہلے ہی پیدا ہو چکی ہے۔لہذا، UNG سسٹم کو متعلقہ ٹیسٹ کے آغاز میں استعمال کیا جانا چاہیے، اور UNG سسٹم کو PCR ایمپلیفیکیشن کے لیے استعمال کیا جانا چاہیے، تاکہ PCR مصنوعات کی False Positive کو آلودگی سے بچایا جا سکے۔
بڑے پیمانے پر جانچ کرتے وقت Foregene کے براہ راست PCR-UNG سسٹم کو استعمال کرنے کی سفارش کی جاتی ہے، جیسے:
پلانٹ لیف ڈائریکٹ پی سی آر کٹ-یو این جی؛
پلانٹ سیڈ ڈائریکٹ پی سی آر کٹ-یو این جی؛
جانوروں کے ٹشو ڈائریکٹ پی سی آر کٹ-یو این جی؛
ماؤس ٹیل ڈائریکٹ پی سی آر کٹ-یو این جی؛
زیبرا فش ڈائریکٹ پی سی آر کٹ-یو این جی۔
Foregene سے کٹس کا یہ سلسلہنہ صرف پی سی آر کا پتہ لگانے کو تیزی سے اور بڑے پیمانے پر انجام دے سکتا ہے بلکہ پی سی آر پروڈکٹ کی آلودگی کو مؤثر طریقے سے روک سکتا ہے۔
پوسٹ ٹائم: مارچ 19-2021
