مصنفین: وانگ ژاؤان، ژاؤ ایریو

یونٹ: جیاؤ زو ہسپتال، ٹونگجی یونیورسٹی سے منسلک ڈونگ فانگ ہسپتال

اس وقت، سانس کے پیتھوجین نیوکلک ایسڈ کا پتہ لگانے کے لیے نمونہ کی اہم قسم گلے کی جھاڑو ہے۔عام طور پر استعمال ہونے والے نمونے کے تحفظ کے کئی قسم کے حل ہیں، جن میں سے سبھی کو نقل و حمل اور ذخیرہ کرنے کے لیے فریج یا منجمد کرنے کی ضرورت ہے۔جمع کرنے اور نقل و حمل کے عمل کے دوران کم درجہ حرارت کے پورے عمل کو کنٹرول کرنا مشکل ہے، اور نمونے کی جانچ سے پہلے کوالٹی کنٹرول کو یقینی بنانا مشکل ہے۔^[1-2].

RNase (RNase) ایک endonuclease ہے جو RNA کو ہائیڈولائز کرتا ہے، بنیادی طور پر نیوکلیوٹائڈس کے درمیان فاسفوڈیسٹر بانڈز کو منقطع کرتا ہے۔RNase مالیکیول بہت مستحکم ہے، ڈھانچے میں ڈسلفائیڈ بانڈز ہیں، اور اس کی سرگرمی کو divalent cations کی موجودگی کی ضرورت نہیں ہے، لہذا RNase آسانی سے ڈینیچر نہیں ہوتا ہے، اور اعلی درجہ حرارت یا denaturants کے استعمال کے بعد بھی اسے رینیچر کرنا آسان ہے۔RNases کو endogenous اور exogenous میں تقسیم کیا گیا ہے۔اینڈوجینس RNases کو اسی وقت جاری کیا جاسکتا ہے جب خلیات پھٹ جاتے ہیں۔لہذا، endogenous RNases کے کردار کو ختم کرنا RNA نکالنے کے عمل میں ایک بہت اہم مرحلہ ہے۔Exogenous RNases بڑے پیمانے پر تقسیم کیے جاتے ہیں۔RNases ہوا، انسانی جلد، بالوں اور تھوک میں موجود ہیں، جو RNA کے آسانی سے انحطاط کی اہم وجوہات ہیں۔^[3].

ڈیٹا کا استفسار

CANS-CL02-A009 تکنیکی ضروریات میں "میڈیکل لیبارٹری کے معیار اور قابلیت کی منظوری کے رہنما خطوط کا اطلاق" تکنیکی تقاضوں میں تجویز کرتا ہے کہ درخواست کے مطابق پانی کے معیار کے مناسب معیارات وضع کیے جائیں۔ڈسپوزایبل ایئر ٹائٹ کنٹینرز:

RNase/درجہ بندی

(1) RNase A

رائبونیوکلیز اے (RNase A)، جو بوائین لبلبہ سے اخذ کیا گیا ہے، ایک اینڈوریبونیوکلیز ہے جو خاص طور پر آر این اے پر پائیریمائڈائن کی باقیات کے 3′ سرے پر حملہ کر سکتا ہے، ملحقہ نیوکلیوٹائڈز کے ذریعے بننے والے سائٹوسین یا یوریسل کو کاٹ سکتا ہے۔فاسفوڈیسٹر بانڈ، ردعمل کی حتمی پیداوار ایک 3′ پیریمائڈائن نیوکلیوٹائڈ ہے اور ایک اولیگونیوکلیوٹائڈ ہے جس کے آخر میں 3′ پیریمائڈائن نیوکلیوٹائڈ ہے۔

(2) RNase T1

Ribonuclease T1 (RNase T1) Aspergillus orjzae سے ماخوذ ہے، یہ خاص طور پر گیانین کے 3′-ٹرمینل فاسفیٹ پر کام کرتا ہے، اور کلیویج سائٹ گیانین کے 3′ فاسفیٹ اور ملحقہ کے 5′ ہائیڈروکسیل کے درمیان ہے۔رد عمل کی حتمی پیداوار 3′guanylic acid اور oligonucleotide کے ٹکڑے ہیں جن کے آخر میں 3′guanylic ایسڈ ہے۔

(3) RNase H

Ribonuclease H (RNase H) سب سے پہلے بچھڑے کے thymus ٹشو سے دریافت کیا گیا تھا، اور اس کے انکوڈنگ جین کو Escherichia coli میں کلون کیا گیا ہے۔یہ خاص طور پر ڈی این اے کو کم کر سکتا ہے: RNA ہائبرڈ ڈوپلیکس میں RNA اسٹرینڈز، جس کے نتیجے میں 3′-OH اور 5′-monophosphate کے ساتھ oligonucleotides اور mononucleotides ہوتے ہیں، یہ سنگل یا ڈبل ​​پھنسے ہوئے DNA یا RNA کو کم نہیں کر سکتا۔

آر نیس

فنکشن اور استعمال

Ribonuclease ribonucleic acid (RNA) کے انحطاط کو اتپریرک کر سکتا ہے اور اسے مصنوعی طور پر ترکیب کیا جا سکتا ہے۔دواؤں کا مرہم بنیادی طور پر صدمے اور جوڑوں کے درد کے علاج کے لیے استعمال کیا جاتا ہے۔رپورٹس کے مطابق، ربونوکلیز میزبان سیل میٹابولزم کو تبدیل کر سکتا ہے، وائرس کی ترکیب کو روک سکتا ہے، وٹرو میں انفلوئنزا وائرس کے پھیلاؤ کو روک سکتا ہے، اور چکن ایمبریو میں ویکسینیا اور ہرپس وائرس کی تشکیل کو روک سکتا ہے۔رائبونیوکلیز کا روزانہ 180 ملی گرام کے انٹرماسکلر انجیکشن کا کلینیکل استعمال، وبائی امراض کے علاج کے لیے فائدہ مند، رائبونیوکلیز رائبونیوکلیز ایسڈ (RNA) کے انحطاط کو متحرک کر سکتا ہے، اور اب اسے مصنوعی طور پر ترکیب کیا جا سکتا ہے۔دواؤں کا مرہم بنیادی طور پر صدمے اور جوڑوں کے درد کے علاج کے لیے استعمال کیا جاتا ہے۔رپورٹس کے مطابق، ربونوکلیز میزبان سیل میٹابولزم کو تبدیل کر سکتا ہے، وائرس کی ترکیب کو روک سکتا ہے، وٹرو میں انفلوئنزا وائرس کے پھیلاؤ کو روک سکتا ہے، اور چکن ایمبریو میں ویکسینیا اور ہرپس وائرس کی تشکیل کو روک سکتا ہے۔180 ملی گرام ریبونیوکلیز کا روزانہ انٹرماسکلر انجکشن کا طبی استعمال وبائی امراض کے علاج کے لیے فائدہ مند ہے۔

آر نیس

روکنے والے کی تعریف

RNase inhibitor یونٹ کی تعریف: 5ng RNase A کی سرگرمی کے 50% کو روکنے کے لیے درکار انزائم کی مقدار ایک یونٹ ہے۔

RNase inhibitors کیسے کام کرتے ہیں۔

Guanidine isothiocyanate:

Guanidine isothiocyanate ایک نامیاتی مرکب ہے جس میں سالماتی فارمولہ C2H6N4S ہے۔بنیادی طور پر حیاتیاتی ادویات، کیمیائی ری ایجنٹس وغیرہ میں استعمال کیا جاتا ہے۔ Guanidine isothiocyanate ایک پروٹین lysing ایجنٹ ہے، اور یہ اکثر مالیکیولر تشخیصی ری ایجنٹس میں lysis محلول کے اہم جزو کے طور پر استعمال ہوتا ہے۔یہ بافتوں کو لیس کر سکتا ہے، خلیے کی ساخت کو تباہ کر سکتا ہے اور نیوکلیئک ایسڈ کو نیوکلیوپروٹین سے الگ کر سکتا ہے، اور RNase میں مضبوط ڈینیچریشن رکھتا ہے۔یہ اس وقت سب سے مؤثر RNase روکنے والا ہے۔

TRIzol ایک نیا کل RNA نکالنے والا ریجنٹ ہے جو خلیوں یا بافتوں سے براہ راست کل RNA نکال سکتا ہے۔اس میں فینول اور guanidine isothiocyanate جیسے مادے ہوتے ہیں، جو تیزی سے خلیات میں خلل ڈال سکتے ہیں اور خلیات کے ذریعے جاری ہونے والے نیوکلیز کو روک سکتے ہیں۔

(تاہم، guanidine isothiocyanate لیبارٹری کے محققین کی صحت کے لیے خطرناک ہے۔)

آر ناسین:

ایسڈ گلائکوپروٹین چوہے کے جگر یا انسانی بلاسٹوڈرم سے نکالا جاتا ہے۔Rnasin RNase کا ایک غیر مسابقتی روکنے والا ہے، جو مختلف RNases کو ان کو غیر فعال کرنے کے لیے باندھ سکتا ہے۔

(مزید تفصیلات:https://www.foreivd.com/foreasy-rnase-inhibitor-product/)

Hاعلی درجہ حرارت:

اعلی درجہ حرارت پروٹین کی کمی کا ایک عام ذریعہ بھی ہے۔

Diethylpyrocarbonate (DEPC):

DEPC ایک مضبوط لیکن نامکمل RNase inhibitor ہے، جو RNase کی سرگرمی کو روک سکتا ہے RNase ایکٹو گروپ کے امینو ایسڈ imidazole رنگ کے ساتھ ملا کر پروٹین کو ڈینیچر کرنے کے لیے۔

وینڈیل رائبونیوکلیوسائڈ کمپلیکس:

وینڈیم آکسائیڈ آئنوں اور نیوکلیوسائیڈز کے ذریعے تشکیل پانے والا ایک کمپلیکس، جو منتقلی مادوں کی شکل میں RNase سے منسلک ہوتا ہے، جو RNase کی سرگرمی کو تقریباً مکمل طور پر روک سکتا ہے۔

دیگر:

ایس ڈی ایس، یوریا، ڈائیٹومیسیئس ارتھ وغیرہ کا بھی RNase پر ایک خاص روکا اثر ہوتا ہے۔

ماہرین کے جائزے

لی یوجی چیف ٹیکنیشن

لیبارٹری ڈیپارٹمنٹ کے ڈائریکٹر، جیاؤ زو ہسپتال، ٹونگجی یونیورسٹی سے منسلک ڈونگ فانگ ہسپتال

Exogenous RNase کے بائیو ڈی گریڈیشن کو روکنے کے لیے، RNA نکالنے کے عمل کے دوران ماسک، دستانے اور ٹوپیاں پہننا اور بار بار تبدیل کرنا چاہیے۔تمام شیشے کے برتنوں کو خشک کرنے والے تندور میں 200 ° C پر 2 گھنٹے سے زیادہ پکانا چاہیے۔بیکنگ کے لیے استعمال ہونے والے مواد، جیسے پلاسٹک، کو DEPC پانی سے ٹریٹ کرنے کی ضرورت ہے، اور پھر ڈسٹل واٹر سے دھویا جائے۔آر این اے کو نکالنے، محفوظ کرنے اور شناخت کرنے کے لیے استعمال ہونے والے ریجنٹس یا آلات کو آر این اے کے لیے وقف کیا جانا چاہیے، اور ایک آزاد آر این اے آپریشن ایریا قائم کیا جانا چاہیے۔

حوالہ جات:

[1] Smith-Vaughan HC, Binks MJ, Beissbarth J, et al.مقامی آسٹریلوی بچوں میں سانس کے نچلے حصے میں شدید انفیکشن شروع ہونے سے فوراً پہلے ناسوفرینکس میں بیکٹیریا اور وائرس۔Eur J Clin Microbiol Infect Dis,2018,37 (9): 1785-1794۔

[2] چائنیز پریوینٹیو میڈیسن ایسوسی ایشن کی ہسپتال کی انفیکشن کنٹرول برانچ۔کلینیکل مائکروبیل نمونوں کے جمع کرنے اور معائنہ کرنے کے لئے رہنما خطوط [J]۔چینی جرنل آف ہسپتال انفیکشن، 2018(20):3192-3200۔

[3] "کلینیکل ٹیسٹ دس ہزار کیوں مالیکیولر بائیولوجی ٹیسٹ والیوم"