تعارف:

RNA، سائنسی نام ribonucleic acid، اس کا مخفف RiboNucleic Acid سے آتا ہے، ایک قسم کا نیوکلیک ایسڈ ہے جو فاسفوڈسٹر بانڈز کے ذریعے کم از کم درجنوں رائبونیوکلیوٹائڈس کو جوڑ کر تشکیل دیا جاتا ہے۔

آر این اے کی کھوج کی بنیاد آلودگی سے پاک ٹوٹل آر این اے کو نکالنا ہے، اور آر این اے نکالنے کے بنیادی اصول کا تقریباً اس طرح خلاصہ کیا جا سکتا ہے:

1. پہلے خلیات میں خلل ڈالیں۔

2. پھر میکرو مالیکولر نجاست (پروٹینز، لپڈز، ڈی این اے وغیرہ) کو ہٹا دیں۔

3. آخر میں، نمکیات اور نامیاتی سالوینٹس کو ہٹاتے ہوئے، اور آر این اے کو مزید صاف کرتے ہوئے آر این اے کو تیز کیا جاتا ہے۔

نکالنے کے طریقہ کار کا ماضی اور حال

RNA نکالنے کے طریقہ کار کی پہلی نسل TRIzol ورن کا طریقہ ہے (استعمال شدہ ریجنٹس میں guanidine isothiocyanate، phenol، chloroform، وغیرہ شامل ہیں) ایک دادا نامی Piotr Chomczynski اور دادی Nicoletta Sacchi نے ایجاد کیا، کیونکہ یہ ایجاد RNA نکالنے کی اجازت دیتی ہے، RNA کی فوری اور آسانی سے تحقیق شروع ہوئی۔

بعد میں، دادا جی نے یہ پیٹنٹ Invitrogen کو فروخت کیا، اور Invitrogen نے اس طریقہ کو دنیا میں فروغ دیا اور ایک وسیع پیمانے پر استعمال ہونے والا طریقہ بن گیا۔

بعد میں، انویٹروجن کو تھرمو نے حاصل کیا!

نمائندہ مصنوعات: انویٹروجن کا TRIzol ری ایجنٹ

تاہم، TRIzol بارش کے طریقہ کار میں ایک سے زیادہ بارش اور RNA نکالنے کی ضرورت ہوتی ہے، اور استعمال شدہ ریجنٹس زہریلے ہوتے ہیں اور کام کرنے میں کافی وقت لگتا ہے۔

لہذا، دوسری نسل کا کالم اینزائم صاف کرنے کا طریقہ وجود میں آیا، جس میں سیلیکا جیل جھلی کو ایک مخصوص نیوکلک ایسڈ جذب کرنے والے مواد کے طور پر استعمال کیا جاتا ہے تاکہ نمونے میں RNA کی وصولی کو زیادہ سے زیادہ کیا جا سکے جبکہ دیگر نجاستوں کو دور کیا جا سکے۔

دوسری نسل کا طریقہ مستحکم کارکردگی کی بنیاد پر آپریشن کو آسان بناتا ہے، خطرے کے عنصر کو کم کرتا ہے، اور RNA نکالنے کی کارکردگی کو بہتر بناتا ہے۔

نمائندہ مصنوعات: QIAGEN RNeasy اور زیادہ تر گھریلو مصنوعات

تاہم، پہلی اور دوسری نسل کے دونوں طریقوں میں ڈی این اے کی آلودگی کو دور کرنے کے لیے DNase کے استعمال کی ضرورت ہوتی ہے، جس سے بعد کے بہاو کے تجربات میں کچھ تکلیف ہوتی ہے۔بقایا DNase ریورس ٹرانسکرپشن کی کارکردگی کو کم کر دے گا اور پہلے اسٹرینڈ سی ڈی این اے کی ترکیب کو کم کر دے گا، اس طرح نتائج کی درستگی پر اثر پڑے گا۔

لہذا، تیسری نسل نکالنے کا طریقہ دوسری نسل کی بنیاد پر بہتر بنایا گیا ہے۔تجربے میں کسی خامرے کو شامل کرنے کی ضرورت نہیں ہے، اور RNA آسانی سے صرف دو کالموں سے حاصل کیا جا سکتا ہے۔

کالم 1: ڈی این اے کو صاف کرنے کے لیے ڈی این اے کلیننگ کالم

کالم 2: صرف آر این اے کالم خاص طور پر آر این اے کو جذب اور بازیافت کرتا ہے۔

اس طرح کا سادہ آپریشن نہ صرف وقت بچاتا ہے، بلکہ بہاو کے تجربات کے آپریشن میں بھی سہولت فراہم کرتا ہے!

نمائندہ مصنوعات: QIAGEN RNeasy Plus اورفارجینآر این اے پیوریفیکیشن سیریز کی مصنوعات

(RNeasy Plus)

(فارجین کیپلانٹ ٹوٹل آر این اے آئسولیشن کٹ)

خاموشی سے بتاؤ!Foregene کی RNA کٹ ایک انتہائی آسان استعمال کرنے والا RNase Eraser بھی پیش کرتی ہے، جو انسانی جسم میں کوئی زہریلا مادہ ڈالے بغیر، 1 منٹ میں ٹھوس سطح پر 400μg RNase کو مکمل طور پر ہٹا سکتا ہے!

تصویر1: آپریشنل عمل کا موازنہ چارٹ

Foregene کی مصنوعات صرف دو گانوں میں RNA نکالنے کو مکمل کر سکتی ہیں، دوسروں کو اپنے تجربے کی پیشرفت پر رشک نہ کریں!

تصویر2:Eتجرباتی نتائج موازنہ چارٹ

پہلی نسل (1: TRIzol)

دوسری نسل (2: QIAGEN کی RNeasy)

تیسری نسل (3: QIAGEN's RNeasy plus, 4: Foregene)

تصویر3: کیو پی سی آر گراف (ایمپلیفیکیشن کریو گراف)

پہلی نسل (سبز کا مطلب ہے TRIzol -، سرخ کا مطلب TRIzol +)

دوسری نسل (اسکائی بلیو کا مطلب ہے QIAGEN RNeasy-، سرخ کا مطلب QIAGEN RNeasy +)

تیسری نسل (نیلے کا مطلب ہے QIAGEN RNeasy پلس، سبز کا مطلب Foregene)

(نوٹ: qPCR گراف "-" اشارہ کرتا ہے کہ DNase شامل نہیں کیا گیا ہے اور DNA آلودگی کو دور نہیں کیا گیا ہے۔ لہذا، CT زیادہ ہے اور نتیجہ درست نہیں ہے؛ "+" اشارہ کرتا ہے کہ DNase شامل کیا گیا ہے اور DNA آلودگی کو ہٹا دیا گیا ہے، نتیجہ درست ہے)

ہر تکنیکی اپ گریڈ کا مطلب یہ ہے کہ تجربے کا عمل آسان اور زیادہ صارف دوست سمت میں ترقی کر رہا ہے۔

Foregene کا مقصد زیادہ سائنسی محققین کو تجرباتی وقت اور لاگت کو بچانے، اعلیٰ معیار کے تجرباتی نتائج حاصل کرنے، اور مشترکہ طور پر زیادہ قیمتی سائنسی تحقیقی کامیابیاں تخلیق کرنے میں مدد کرنا ہے۔