آپ کتنا جانتے ہیں۔

N کے بارے میںیوکلک ایسڈ نکالنا

پیوریفائیڈ نیوکلک ایسڈ کا آغاز اور اختتام

سب کچھ شروع میں مشکل ہے، پیوریفائیڈ نیوکلک ایسڈ سب سے زیادہ ہے۔

سالماتی تجربات کا آغاز، بعد کے تجربات کے لیے

کامیابی یا ناکامی کا ایک اہم اثر ہوتا ہے۔

ٹریس/الٹرا ٹریس UV سپیکٹرو فوٹومیٹر کو بہت سے سائنسی محققین نے پسند کیا ہے کیونکہ یہ نیوکلک ایسڈ کے ارتکاز اور پروٹین اور نمک آئن کی باقیات کا آسانی سے، جلدی اور اقتصادی طور پر پتہ لگا سکتا ہے۔

جیسا کہ ہم سب جانتے ہیں، A260 کا مطلب ہے نیوکلک ایسڈ جاذب OD قدر، A280 کا مطلب ہے پروٹین کا ارتکاز جاذب OD قدر، A230 کا مطلب ہے نمک کے آئن کے ارتکاز جاذب OD قدر، لہذا A260 نیوکلک ایسڈ کے ارتکاز کو تبدیل کر سکتا ہے، A260/280 کا مطلب ہے پروٹین کی باقیات، A260/260 کا مطلب یہ ہے کہ صرف نمکیات کی بنیاد پر تحقیق، A260/260 کا مطلب ہے کہ پروٹین کی باقیات دریافت کریں پیمائش کے نتائج کی ایک بڑی تعداد پر، اور یہ ہے "روایتییہ یقین کرنا کہ یہ ڈی این اے اور آر این اے کی پاکیزگی کی وضاحت کر سکتا ہے۔ایک خاص حد تک.نیوکلک ایسڈ کی پیداوار اور پاکیزگی کی شناخت کے لیے یہ واحد معیار نہیں ہے، یہ صرف ایک حوالہ کے طور پر استعمال ہوتا ہے، اور یہ "سونے کا معیار" نہیں ہے۔

Thermo Fisher ND-2000 دستی ٹیسٹ کے نتائج کی وشوسنییتا پر زور دیتا ہے

وجہ یہ ہے کہ مائیکرو/الٹرا مائیکرو یووی سپیکٹرو فوٹومیٹر کے استعمال سے حاصل ہونے والے نتائج صرف نیوکلک ایسڈ کی طرف سے حاصل ہونے والی پیداوار اور پاکیزگی کی عکاسی کرتے ہیں، اور بہت سے متاثر کرنے والے عوامل ہیں (آپٹیکل پاتھ، نمونے کا حجم، نمونہ کا ارتکاز، پی ایچ ویلیو، دیگر آئنز جو جاذب کی پیمائش کو متاثر کرتے ہیں، وغیرہ)، OD کی قدر ضروری نہیں ہے۔ایک ہی وقت میں، جاذب قدر کے تعین کے مواد کی مخصوصیت کی کمی کی وجہ سے، واحد پھنسے ہوئے DNA، ڈبل پھنسے ہوئے DNA، RNA، dNTPs، اور کچھ پروٹین سبھی کی جذب کی چوٹی 260nm طول موج پر ہوتی ہے، اور اکیلے A260 کے ذریعے متعین کردہ ارتکاز ضروری نہیں کہ DNA حقیقی RNA ہو۔ارتکاز، اور اس کی سالمیت اور انحطاط کا اندازہ نہیں لگایا جا سکتا۔

تو ہمارے پیوریفائیڈ نیوکلک ایسڈ کے معیار کا فیصلہ کیسے کریں؟پتہ لگانے کے لیے مائیکرو/الٹرا مائیکرو یووی سپیکٹرو فوٹومیٹر استعمال کرنے کے علاوہ، نیوکلک ایسڈ کی پاکیزگی اور سالمیت کو بصری طور پر ظاہر کرنے اور ایک خاص حد تک ارتکاز کی نشاندہی کرنے کے لیے ایگرز جیل الیکٹروفورسس جیسے طریقوں کی بھی ضرورت ہے۔اس طرح مختلف طریقوں سے پتہ لگانے کے نتائج سے حاصل ہونے والی نیوکلک ایسڈ کی پیداوار اور پاکیزگی قابل اعتبار ہے۔

تجرباتی چارٹ کا موازنہ

H1299 خلیات کے جینومک DNA کو کمپنی A کی DNA ایکسٹریکشن کٹس کا استعمال کرتے ہوئے نکالا گیا، اور نمایاں ناپاک آلودگی دیکھی گئی، جس کے نتیجے میں OD کی قدریں زیادہ ہوئیں۔

(OD پیمائش کی قدر اور متعلقہ الیکٹرو فیروگرام)

تشخیصی اشاریہ

کیا نیوکلک ایسڈ کی پیداوار اور معیار کی جانچ کے لیے کوئی "سونے کا معیار" ہے؟

جہاں تک ہم جانتے ہیں، کوئی آسان، تیز اور سستا طریقہ نہیں ہے۔چاہے یہ سپیکٹرو فوٹومیٹر ہو، جیل الیکٹروفورسس، یا ماس اسپیکٹومیٹری، یہ سب مختلف پہلوؤں سے محلول میں نیوکلک ایسڈ کے ارتکاز اور پاکیزگی کی عکاسی کرتے ہیں، اور انہیں ایک دوسرے کا حوالہ دے کر جانچنے کی ضرورت ہے۔

بہترین تشخیص انڈیکس ہمیشہ ہوتا ہے۔فالو اپ تجرباتی درخواست.یہ ریورس ٹرانسکرپشن اور پی سی آر ایمپلیفیکیشن کی کارکردگی کو متاثر نہیں کرتا ہے۔قابل اعتماد امپلیفیکیشن مصنوعات اور Ct قدریں حاصل کرنا، اور ترتیب کے ذریعے ایک مکمل ترتیب حاصل کرنا کامیاب نیوکلک ایسڈ نکالنا ہے۔

خلاصہ یہ ہے کہ صرف تناسب کے نظریہ کو "اچھے بہاو کے تجرباتی نتائج کو اچھے نکالنے کے پیرامیٹرز کے طور پر استعمال کرنے" کے نقطہ نظر سے چیلنج کیا جانا چاہیے!

اعلی DNA/RNA پاکیزگی حاصل کرنے کے لیے تجویز کردہ Foregene DNA RNA نکالنے والی کٹس:

https://www.foreivd.com/reagent/dna-isolation-series/

https://www.foreivd.com/reagent/rna-isolation-series/