لیڈ

لانگ نان کوڈنگ RNA، lncRNA ایک نان کوڈنگ RNA ہے جس کی لمبائی 200 نیوکلیوٹائڈز سے زیادہ ہوتی ہے، عام طور پر 200-100000 nt کے درمیان۔lncRNA ایپی جینیٹک، ٹرانسکرپشن اور پوسٹ ٹرانسکرپشن سطحوں پر جین کے اظہار کو منظم کرتا ہے، اور X کروموسوم سائیلنسنگ، جینوم امپرنٹنگ اور کرومیٹن میں ترمیم، ٹرانسکرپشن ایکٹیویشن، ٹرانسکرپشن مداخلت، نیوکلیئر ٹرانسپورٹ، سیل سائیکل ریگولیشن، سیل ڈیفرینسیشن اور کمپریشن کے دیگر اثرات کو کنٹرول کرتا ہے انسانی بیماریوں کی موجودگی، نشوونما اور روک تھام سے گہرا تعلق ہے، اور فی الحال بائیو میڈیسن کے میدان میں گرم مقامات میں سے ایک ہے۔

01  LncRNA کی اقسام اور خصوصیات

lncRNA کو اس کی تشکیل کے مختلف ذرائع کے مطابق کئی اقسام میں تقسیم کیا گیا ہے جیسا کہ اوپر دی گئی تصویر میں دکھایا گیا ہے۔مندرجہ ذیل خصوصیات ہیں:

1. lncRNAs عام طور پر لمبے ہوتے ہیں، متحرک اظہار اور تفریق کے دوران الگ الگ کرنے کے مختلف طریقوں کے ساتھ
2. کوڈنگ جینز کے مقابلے میں، lncRNA میں عام طور پر اظہار کی سطح کم ہوتی ہے۔
3. زیادہ تر lncRNAs میں بافتوں کی تفریق اور نشوونما کے عمل میں واضح وقتی اور مقامی اظہار کی خصوصیت ہوتی ہے۔
4. ٹیومر اور دیگر بیماریوں میں خصوصیت کے اظہار ہیں
5. lncRNA کے ذیلی خلوی مقامات متنوع ہیں۔
6. ترتیب تحفظ میں کم ہے، لیکن فنکشن میں ایک خاص حد تک تحفظ ہے، وغیرہ۔

02 LncRNA ریورس ٹرانسکرپشن کے بارے میں اکثر پوچھے گئے سوالات

خلیوں میں lncRNA کے کم مواد، لمبی لمبائی اور اعلیٰ سطح کی ساخت کی وجہ سے، ایسے RNA میں اکثر پیچیدہ ڈھانچے ہوتے ہیں جیسے کہ اسٹیم لوپس یا ہیئر پن، اور RT-qPCR ناکام ریورس ٹرانسکرپشن یا کم کارکردگی کے مسائل کا شکار ہوتا ہے۔

03 LncRNA ریورس ٹرانسکرپشن حل

مرکزی اصول میں، آر این اے وائرسز کے اپنے ریورس ٹرانسکرپٹیس کا استعمال کرتے ہوئے ڈی این اے کو ٹیمپلیٹ کے طور پر استعمال کرتے ہوئے ڈی این اے کی ترکیب کرنے کے عمل کو ریورس ٹرانسکرپشن کہا جاتا ہے۔وٹرو میں سی ڈی این اے ٹیمپلیٹ کی ترکیب کے لیے آر این اے وائرس ریورس ٹرانسکرپٹیس استعمال کرنے کے عمل کو ریورس ٹرانسکرپشن کہا جاتا ہے۔ریورس ٹرانسکرپشن سسٹم میں شامل اہم عناصر: آر این اے ٹیمپلیٹ، ریورس ٹرانسکرپٹیس، پرائمر اور دیگر اجزاء۔

1.RNA ٹیمپلیٹ

ریورس ٹرانسکرپشن پر آر این اے ٹیمپلیٹ کا اثر اس کی ساخت، پاکیزگی اور سالمیت سے ظاہر ہوتا ہے۔نکالے گئے RNA کی پاکیزگی اور سالمیت جتنی زیادہ ہوگی، ریورس ٹرانسکرپشن کی کارکردگی اتنی ہی زیادہ ہوگی اور بعد میں آنے والے مقداری نتائج اتنے ہی درست ہوں گے۔عام طور پر استعمال ہونے والے آر این اے نکالنے والے ری ایجنٹس کے ذریعے صاف کیے جانے والے آر این اے میں اکثر الکحل اور گوانائیڈائن نمکیات کی باقیات ہوتی ہیں، جن کا زیادہ تر ریورس ٹرانسکرپٹیس پر مضبوط روک تھام کا اثر ہوتا ہے۔

2. ریورس ٹرانسکرپٹیز

ریورس ٹرانسکرپٹیس کا پورے ریورس ٹرانسکرپشن سسٹم میں کلیدی اثر ہے۔زیادہ تر لیبارٹریوں میں استعمال ہونے والے ریورس ٹرانسکرپٹیس کے لیے موزوں درجہ حرارت عام طور پر 42 °C ہوتا ہے۔درحقیقت، اعلیٰ سطحی آر این اے ڈھانچے کو کھولنے کے لیے زیادہ درجہ حرارت کی ضرورت ہوتی ہے، اور ریورس ٹرانسکرپٹیس کی ضروریات زیادہ ہوتی ہیں۔

3.پرائمر

ریورس ٹرانسکرپشن پرائمر میں جین کے لیے مخصوص پرائمر، رینڈم پرائمر اور اولیگو ڈی ٹی پرائمر شامل ہیں۔زیادہ تر lncRNAs میں پولی اے ٹیل نہیں ہوتے ہیں، اور یہ ضروری ہے کہ اولیگو ڈی ٹی کے ساتھ بے ترتیب پرائمر کو مناسب طریقے سے ملایا جائے۔

4. دیگر اجزاء

اس حقیقت کے پیش نظر کہ RNA کو کم کرنا خاص طور پر آسان ہے، ریورس ٹرانسکرپشن سسٹم میں اجزاء کے تعارف کو کم کیا جا سکتا ہے، جو RNase کے داخلے کو مؤثر طریقے سے روک سکتا ہے اور ریورس ٹرانسکرپشن کی ہموار پیش رفت کو یقینی بنا سکتا ہے۔

Fاوریجینآر این اے ٹیمپلیٹ سے حاصل کرتا ہے، کیو پی سی آر میں ٹرانسکرپشن کو ریورس کریں۔

اپنے lncRNA کا پتہ لگانے کی جامع حفاظت کریں۔

جانوروں کی کل RNA Iحلکٹ (gDNA ہٹانے والے کالم کے ساتھ)

سیل کل RNA Iحلکٹ (gDNA ہٹانے والے کالم کے ساتھ)

Lnc-RT HeroTM I (gDNase کے ساتھ) (lncRNA سے فرسٹ اسٹرینڈ cDNA ترکیب کے لیے سپر پریمکس)

ریئل ٹائم PCR EasyTM-SYBR گرین I

Aفوائد ofآر این اے نکالنا:

کٹ تیسری نسل کی RNA نکالنے والی ٹیکنالوجی کا استعمال کرتی ہے، DNase استعمال کرنے کی ضرورت نہیں ہے۔

96، 24، 12، اور 6 اچھی طرح سے پلیٹ کلچرڈ سیلز سے 11 منٹ، جی ڈی این اے سے پاک، اعلیٰ پاکیزگی، اعلیٰ معیار کے کل سیل آر این اے کا اعلیٰ کارکردگی۔

lncRNA ریورس ٹرانسکرپشن کے فوائد:

جینومک ڈی این اے کی آلودگی کو فوری طور پر دور کرنے کے لیے خاص طور پر LncRNA کے لیے ایک ریورس ٹرانسکرپشن سسٹم تیار کیا گیا ہے۔

ریورس ٹرانسکرپشن سسٹم میں اعلی تھرمل استحکام ہے اور پھر بھی 50°C پر ریورس ٹرانسکرپشن کی اچھی کارکردگی ہے۔

اعلی GC مواد اور پیچیدہ ثانوی ساخت کے ساتھ ٹیمپلیٹس کو اعلی کارکردگی کے ساتھ تبدیل کیا جا سکتا ہے۔

فوائدof qپی سی آر:

ہاٹ سٹارٹ فورجین ٹاک پولیمریز میں اعلیٰ امپلیفیکیشن کی کارکردگی، اعلیٰ امپلیفیکیشن حساسیت، اور اعلی امپلیفیکیشن کی خصوصیت ہے۔

آپٹمائزڈ ریئل پی سی آر ایزی مکس SYBR گرین I کو پتہ لگانے کی زیادہ حساسیت کا حامل بناتا ہے، اور اس کی فلوروسینس کی شدت اسی طرح کی مصنوعات سے 3-5 گنا ہے، جو مختلف قسم کے فلوروسینس مقداری تجربات کی ضروریات کو پورا کر سکتی ہے۔