میں ممکنہ مسائل کا مندرجہ ذیل تجزیہبکلجھاڑو/ایف ٹی اے card DNA extraction is helpful to your experiment. In addition, for other experimental or technical problems in addition to operating instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. If you have any needs, please contact us at: 028-83360257 or E-mali:Tech@foregene.com.

طہارت کا کالم بھرا ہوا ہے۔

اس کٹ میں، جینومک ڈی این اے نکالنے کے آپریشن میں، پیوریفیکیشن کالم کو سینٹرفیوگریشن سٹیپ کے بغیر نمونے کے اینزائیمیٹک لیسز مکسچر پر براہ راست جذب کیا جاتا ہے، اور پیوریفیکیشن کالم نامکمل انزائمائزیشن اور نمونے کی زیادہ چپکنے کی وجہ سے بلاک ہو سکتا ہے۔

مندرجہ ذیل ممکنہ وجوہات درج ذیل ہیں۔

1. ٹشو کے نمونوں کا نامکمل انزیمیٹک ہاضمہ۔

تجویز: Foregene Protease کے نمونے کی پروسیسنگ کے وقت کو مناسب طریقے سے بڑھایا جا سکتا ہے یا 12,000 rpm (~13,400) پر سینٹرفیوگریشن کے بعد سپرنٹنٹ لیا جا سکتا ہے۔× جی) 5 منٹ کے لیے۔

2. ٹشو کے نمونوں یا بڑے ٹشوز کا زیادہ استعمال۔

تجویز: یہ بہتر ہے کہ 1 سے زیادہ نہ ہو۔بکل نمونے میں جھاڑو؛اگر نمونہ بہت بڑا ہے تو اس کے مطابق بفر ایس ٹی 1، فورجین پروٹیز، بفر ایس ٹی 2 کی خوراک میں اضافہ کریں۔

3. نمونہ viscosity بہت زیادہ ہے.

تجویز: جینومک ڈی این اے نکالنے سے پہلے نمونوں کو 10 ایم ایم Tris-HCl سے پتلا کیا جا سکتا ہے۔

4. خون کے کارڈ کے ٹکڑے چوس لیے گئے ہیں۔

تجویز: بلڈ اسپاٹ (FTA کارڈ) جینومک نکالنے کے مرحلہ 6 کے عارضی سینٹرفیوگریشن ٹائم کو مناسب طریقے سے بڑھایا جا سکتا ہے۔

کم پیداوار یا کوئی ڈی این اے نہیں۔

اکثر مختلف عوامل ہوتے ہیں جو جینومک ڈی این اے کی پیداوار کو متاثر کرتے ہیں، بشمول نمونے کی اصلیت، نمونہ ذخیرہ کرنے کے حالات، نمونے کی تیاری، ہیرا پھیری وغیرہ۔

نکالنے کے دوران جینومک ڈی این اے حاصل نہیں کیا جا سکتا

ممکنہ وجوہات درج ذیل ہیں:

1. نمونوں کا غلط تحفظ یا زیادہ دیر تک ذخیرہ کرنا جینومک ڈی این اے کے انحطاط کا باعث بنتا ہے۔

تجویز: زبانی جھاڑیوں کو ترجیحی طور پر تازہ نمونہ لیا جانا چاہئے، اور جینومک ڈی این اے نکالنے کے آپریشن کے لیے محفوظ جھاڑو استعمال کرنا مناسب نہیں ہے۔خون کے داغ کے نمونے اس بات کو یقینی بنائیں کہ معیار کوالیفائیڈ ہے اور ذخیرہ کرنے کا وقت زیادہ طویل نہیں ہونا چاہیے۔

2. ٹشو کے بہت کم استعمال کے نتیجے میں متعلقہ جینومک ڈی این اے کا اخراج نہیں ہو سکتا۔

سفارش: پر عمل کریںبکاl آپریشن گائیڈ میں جھاڑو کے نمونے لینے کی ہدایات، اور جتنی بار ممکن ہو صاف کریں تاکہ جینومک ڈی این اے نکالنے کے لیے کافی خلیے زبانی جھاڑو سے منسلک ہو سکیں؛خون کی جگہ کے نمونے نکالنے کے لیے، خون کے دھبے کاٹنے کے علاقے کو مناسب طور پر بڑھایا جا سکتا ہے۔

3. Foregene Protease کو غلط طریقے سے محفوظ کیا جاتا ہے، جس کے نتیجے میں اس کی سرگرمی میں کمی یا غیر فعال ہو جاتی ہے۔

سفارش: کی سٹوریج کے حالات کی تصدیق کریںایفاوریجین پروٹیز یا انزیمیٹک رد عمل کے لیے اسے ایک نئے فورجین پروٹیز سے بدل دیں۔

4. کٹ کا نامناسب تحفظ یا ذخیرہ کرنے کا وقت بہت طویل ہے، جس کے نتیجے میں کٹ میں کچھ اجزاء خراب ہو جاتے ہیں۔

تجویز: ایک نیا خریدیں۔بکل جھاڑو ڈی این اےعلیحدگی متعلقہ طریقہ کار کے لیے کٹ۔

5. بفر ڈبلیو بی مطلق ایتھنول شامل نہیں کرتا ہے۔

تجویز: تصدیق کریں کہ بفر ڈبلیو بی مطلق ایتھنول کا صحیح حجم شامل کرتا ہے۔

6. سلیکون فلم میں ایلیونٹ کو صحیح طریقے سے شامل نہیں کیا گیا ہے۔

تجویز: 65 شامل کریں۔°Cپہلے سے گرم ایلیوینٹ سلیکون جھلی کے بیچ میں گرتا ہے اور ایلیوشن کی کارکردگی کو بڑھانے کے لیے کمرے کے درجہ حرارت پر 5 منٹ کے لیے چھوڑ دیتا ہے۔

Lجینومک ڈی این اے کی پیداوار الگ تھلگ

مندرجہ ذیل ممکنہ وجوہات درج ذیل ہیں۔

1. نمونوں کا غلط تحفظ یا زیادہ دیر تک ذخیرہ کرنا جینومک ڈی این اے کے انحطاط کا باعث بنتا ہے۔

تجویز: زبانی جھاڑیوں کو ترجیحی طور پر تازہ نمونہ لیا جاتا ہے، اور محفوظ شدہ جھاڑیوں کو جینومک ڈی این اے نکالنے کے لیے استعمال نہیں کیا جانا چاہیے۔

2. اگر ٹشو کے نمونے کی مقدار بہت کم ہے، تو نکالا گیا جینومک ڈی این اے مواد کم ہوگا۔

تجویز: آپریٹنگ گائیڈ میں زبانی جھاڑو کے نمونے لینے کی ہدایات پر عمل کریں، جتنی بار ممکن ہو مسح کریں تاکہ جینومک ڈی این اے نکالنے کے لیے کافی خلیے زبانی جھاڑو سے منسلک ہو سکیں۔

3. Foregene Protease کو غلط طریقے سے محفوظ کیا جاتا ہے، جس کے نتیجے میں اس کی سرگرمی میں کمی یا غیر فعال ہو جاتی ہے۔

سفارش: کی سٹوریج کے حالات کی تصدیق کریںthe Fاوریجین پروٹیز یا اسے نئے سے تبدیل کریں۔ انزیمیٹک ردعمل کے لیے فورجین پروٹیز۔

4. Eluent مسائل.

سفارش: elution کے لیے Buffer EB استعمال کریں۔اگر ddH استعمال کر رہے ہیں۔₂O یا دیگر ایلیونٹ، تصدیق کریں کہ ایلیویٹ کا پی ایچ 7.0-8.5 کے درمیان ہے۔

5. ایلیویٹ کو ڈراپ وائز میں صحیح طریقے سے شامل نہیں کیا گیا ہے۔

تجویز: سلیکون جھلی کے بیچ میں ایلیونٹ کے قطرے ڈالیں اور 5 منٹ کے لیے کمرے کے درجہ حرارت پر چھوڑ دیں تاکہ اخراج کی کارکردگی میں اضافہ ہو۔

6. ایلیوشن مائع بہت کم جمع ہوتا ہے۔

تجویز: کم از کم ہدایات میں مطلوبہ جینومک DNA elution کے لیے eluent کا استعمال کریں۔کم نہیں 15 سے زیادہμl.

Lاوہ پاکیزگی of جینومک ڈی این اےالگ تھلگ

کم جینومک ڈی این اے کی پاکیزگی بہاؤ کے تجربات کے ناکامی یا غیر اطمینان بخش نتائج کا باعث بن سکتی ہے، جیسے: انزائمز کو کھلا نہیں کاٹا جا سکتا، PCR دلچسپی کا جین کا ٹکڑا حاصل نہیں کر سکتا، وغیرہ۔

ممکنہ وجوہات درج ذیل ہیں:

1. ہیٹروپروٹین آلودگی، آر این اے آلودگی۔

تجزیہ: پیوریفیکیشن کالم کو بفر پی ڈبلیو کا استعمال کرتے ہوئے نہیں دھویا گیا تھا۔بفر پی ڈبلیو واش پیوریفیکیشن کالم کو درست سینٹرفیوگل رفتار کا استعمال کرتے ہوئے نہیں دھویا گیا تھا۔

تجویز: ایتھنول شامل کرنے سے پہلے اس بات کو یقینی بنائیں کہ سپرنٹنٹ میں کوئی بارش نہیں ہے۔ہدایات کے مطابق صاف کرنے کے کالم کو دھونا یقینی بنائیں، اور اس قدم کو چھوڑا نہیں جا سکتا۔

2. نجاست آئن آلودگی۔

تجزیہ: بفر ڈبلیو بی واش پیوریفیکیشن کالم کو صرف ایک بار چھوڑ دیا گیا یا دھویا گیا، جس کے نتیجے میں بقایا آئنک آلودگی پیدا ہوئی۔

تجویز: بفر ڈبلیو بی کو 2 بار دھونا یقینی بنائیں تاکہ باقی آئنوں کو زیادہ سے زیادہ ہٹانے کی ہدایت کی جائے۔

3. آر این اے انزائم آلودگی۔

تجزیہ: غیر ملکی RNases کو بفر میں شامل کیا گیا تھا۔Buffer PW واش آپریشن غلط تھا، جس کے نتیجے میں RNase باقیات نکلتے ہیں، جو نیچے دھارے والے RNA تجرباتی آپریشنز کو متاثر کرتے ہیں، جیسے وٹرو ٹرانسکرپشن میں۔

تجویز: فورجین سیریز نیوکلک ایسڈisolation کٹس RNase کے اضافی اضافے کے بغیر RNA کو ہٹا سکتی ہیں،اس طرح buccal Swab/FTA کارڈ ڈی این اے آئسولیشن کٹضرورت ہے't RNase شامل کریں؛Buffer PW واشنگ پیوریفیکیشن کالم کی ہدایات پر عمل کرنا یقینی بنائیں، اور اس قدم کو چھوڑا نہیں جا سکتا۔

4. ایتھنول کی باقیات۔

تجزیہ: بفر ڈبلیو بی نے صاف کرنے والے کالم کو دھونے کے بعد خالی ٹیوب سینٹرفیوگریشن نہیں کی۔

تجویز: ہدایات کے مطابق صحیح خالی ٹیوب سینٹرفیوگریشن آپریشن کریں۔

5. دیگر نجاست آلودگی۔

تجزیہ: محفوظ شدہ نمونے یا خصوصی نمونے پہلے سے تیار نہیں کیے جاتے ہیں۔

تجویز: ہدایت کے مطابق نمونے کو اچھی طرح سے تیار کریں۔