مسئلہ تجزیہ گائیڈ

مندرجہ ذیل ان مسائل کا تجزیہ ہے جو وائرل DNA/RNA کو نکالنے میں پیش آ سکتے ہیں، امید ہے کہ آپ کے تجربات میں مددگار ثابت ہوں گے۔اس کے علاوہ، آپریشن کی ہدایات اور مسئلہ کے تجزیہ کے علاوہ دیگر تجرباتی یا تکنیکی مسائل کے لیے، ہم نے آپ کی مدد کے لیے تکنیکی معاونت کو وقف کیا ہے۔اگر آپ کو کوئی ضرورت ہو تو ہم سے رابطہ کریں: 028-83360257 یا ای میل:

Tech@foregene.com.

کوئی نیوکلک ایسڈ نکالنے یا کم نیوکلک ایسڈ کی پیداوار نہیں ہے۔

عام طور پر بہت سے عوامل ہیں جو بحالی کی کارکردگی کو متاثر کرتے ہیں، جیسے: نمونہ نیوکلک ایسڈ کا مواد، آپریشن کا طریقہ، اخراج کا حجم وغیرہ۔

عام وجوہات کا تجزیہ:

1. طریقہ کار کے دوران برف کا غسل یا کم درجہ حرارت (4°C) سینٹرفیوگریشن کیا گیا تھا۔

تجویز: پورے عمل کے دوران کمرے کے درجہ حرارت (15-25°C) پر کام کریں، برف سے غسل نہ کریں اور کم درجہ حرارت سینٹرفیوگریشن نہ کریں۔

2. نمونہ غلط طریقے سے ذخیرہ کیا گیا تھا یا نمونہ بہت طویل عرصے تک ذخیرہ کیا گیا تھا۔

تجویز: نمونوں کو -80 ° C پر اسٹور کریں اور بار بار جمنے اور پگھلنے سے گریز کریں۔نیوکلک ایسڈ نکالنے کے لیے تازہ جمع کیے گئے نمونے استعمال کرنے کی کوشش کریں۔

3. ناکافی نمونہ لیسس۔

تجویز: براہ کرم اس بات کو یقینی بنائیں کہ نمونہ اور لیسس ورکنگ سلوشن کو اچھی طرح سے ملایا گیا ہے اور کمرے کے درجہ حرارت (15-25 ° C) پر 10 منٹ کے لیے انکیوبیٹ کیا گیا ہے۔

4. ایلیونٹ کا غلط اضافہ۔

تجویز: اس بات کو یقینی بنائیں کہ RNase-Free ddH2O کو پیوریفیکیشن کالم میمبرین کے درمیان میں ڈراپ وائز میں شامل کیا گیا ہے، اور اسے پیوریفیکیشن کالم کی انگوٹھی پر نہ گرائیں۔

5. Buffer RW2 میں مطلق ایتھنول کا صحیح حجم شامل نہیں کیا گیا تھا۔

تجویز: براہ کرم ہدایات پر عمل کریں، Buffer RW2 میں مطلق ایتھنول کا صحیح حجم شامل کریں اور کٹ استعمال کرنے سے پہلے اچھی طرح مکس کریں۔

6. نمونے کا نامناسب حجم۔

تجویز: بفر DRL کے ہر 500µl کے لیے 200µl نمونے پر کارروائی کی جاتی ہے۔ضرورت سے زیادہ نمونے کی پروسیسنگ کے نتیجے میں نیوکلک ایسڈ نکالنے کی پیداوار کم ہوگی۔

7. نامناسب اخراج کا حجم یا نامکمل اخراج۔

تجویز: پیوریفیکیشن کالم کا ایلیونٹ حجم 30-50μl ہے۔اگر ایلوشن اثر تسلی بخش نہیں ہے، تو کمرے کے درجہ حرارت پر پہلے سے گرم RNase-Free ddH2O شامل کرنے کے بعد وقت بڑھانے کی سفارش کی جاتی ہے، جیسے کہ 5-10 منٹ۔

8. بفر RW2 سے دھونے کے بعد ایتھنول کالم پر رہتا ہے۔

تجویز: اگر بفر RW2 کے ساتھ سینٹرفیوگریشن کے بعد ایتھنول 2 منٹ تک باقی رہتا ہے، تو کالم کو سینٹرفیوگریشن کے بعد 5 منٹ کے لیے کمرے کے درجہ حرارت پر رکھا جا سکتا ہے تاکہ بقیہ ایتھنول کو مکمل طور پر ختم کیا جا سکے۔

پیوریفائیڈ نیوکلک ایسڈ کم ہو جاتا ہے۔

پیوریفائیڈ نیوکلک ایسڈ کے معیار کا تعلق نمونے کے تحفظ، RNase آلودگی، آپریشن اور دیگر عوامل سے ہے۔عام وجوہات کا تجزیہ:

1. جمع کیے گئے نمونے وقت پر محفوظ نہیں کیے گئے تھے۔

تجویز: اگر نمونہ جمع کرنے کے بعد وقت پر استعمال نہیں کیا جاتا ہے، تو براہ کرم اسے فوری طور پر کم درجہ حرارت پر -80 ° C پر اسٹور کریں۔RNA نکالنے کے لیے، تازہ جمع کیے گئے نمونے استعمال کرنے کی کوشش کریں۔

2. نمونے جمع کریں اور بار بار منجمد اور پگھلیں۔

تجویز: نمونے جمع کرنے اور ذخیرہ کرنے کے دوران جمنے اور پگھلنے سے گریز کریں (ایک سے زیادہ نہیں) ورنہ نیوکلک ایسڈ کی پیداوار کم ہو جائے گی۔

3. آپریشن روم میں RNase متعارف کرایا جاتا ہے یا ڈسپوزایبل دستانے، ماسک وغیرہ نہیں پہنے جاتے ہیں۔

تجویز: RNA نکالنے کے تجربات ایک الگ RNA آپریشن روم میں بہترین طریقے سے کیے جاتے ہیں، اور تجربہ سے پہلے لیبارٹری ٹیبل کو صاف کیا جانا چاہیے۔

تجربے کے دوران ڈسپوزایبل دستانے اور ماسک پہنیں تاکہ RNase کی سب سے زیادہ حد تک تعارف کی وجہ سے ہونے والے RNA کے انحطاط سے بچا جا سکے۔

4. استعمال کے دوران ریجنٹ RNase سے آلودہ تھا۔

تجویز: متعلقہ تجربات کے لیے ایک نئی وائرل DNA/RNA آئسولیشن کٹ کے ساتھ تبدیل کریں۔

5. آر این اے کی ہیرا پھیری کے لیے استعمال ہونے والی سینٹری فیوج ٹیوبیں اور پائپیٹ کے اشارے RNase سے آلودہ ہیں۔

تجویز: اس بات کو یقینی بنائیں کہ آر این اے نکالنے کے لیے استعمال ہونے والی سینٹری فیوج ٹیوبیں، پِیپٹ ٹِپس، پِیپٹس وغیرہ سبھی RNase سے پاک ہیں۔

پیوریفائیڈ نیوکلک ایسڈ بہاو تجربات کو متاثر کرتا ہے۔

ڈی این اے اور آر این اے کو پیوریفیکیشن کالم کے ذریعے صاف کیا جاتا ہے، اگر نمک آئن اور پروٹین کی مقدار بہت زیادہ ہے، تو یہ بہاو کے تجربات کو متاثر کرے گا، جیسے: پی سی آر ایمپلیفیکیشن، ریورس ٹرانسکرپشن، وغیرہ۔

1. ایلوٹڈ ڈی این اے اور آر این اے میں نمک کے بقایا آئن ہوتے ہیں۔

تجویز: یقینی بنائیں کہ مطلق ایتھنول کا صحیح حجم بفر RW2 میں شامل کیا گیا ہے، اور آپریٹنگ ہدایات میں بیان کردہ سینٹرفیوگریشن اسپیڈ پر پیوریفیکیشن کالم کو دو بار دھوئیں؛نمک آئن کی آلودگی کو کم کرنے کے لیے سینٹرفیوگریشن انجام دیں۔

2. ایلوٹڈ ڈی این اے اور آر این اے میں ایتھنول کی باقیات ہوتی ہیں۔

تجویز: بفر RW2 کے ساتھ دھونے کی تصدیق کرنے کے بعد، آپریٹنگ ہدایات میں سینٹرفیوگریشن کی رفتار پر خالی ٹیوب سینٹرفیوگریشن انجام دیں۔اگر اب بھی ایتھنول کی باقیات موجود ہیں تو، آپ خالی ٹیوب کو سینٹری فیوج کر سکتے ہیں اور پھر اسے کمرے کے درجہ حرارت پر 5 منٹ کے لیے رکھ سکتے ہیں تاکہ ایتھنول کی باقیات کو زیادہ سے زیادہ حد تک ہٹایا جا سکے۔

ہدایت نامہ:

وائرل ڈی این اے اور آر این اے آئسولیشن کٹ انسٹرکشن مینول