• فیس بک
  • لنکڈ
  • یوٹیوب

روایتی ریورس ٹرانسکرپٹیس زیادہ درجہ حرارت کو برداشت نہیں کر سکتے ہیں (MMLV سرگرمی کے لیے بہترین درجہ حرارت 37-50°C ہے، اور AMV 42-60°C ہے)۔زیادہ پیچیدہ وائرل RNA کو مؤثر طریقے سے کم درجہ حرارت پر cDNA میں نقل نہیں کیا جا سکتا، جس کے نتیجے میں پتہ لگانے کی کارکردگی میں کمی واقع ہوتی ہے۔روایتی RT-qPCR کو عام طور پر دو کلیدی خامروں (ریورس ٹرانسکرپٹیس اور ڈی این اے پولیمریز) کی شرکت کی ضرورت ہوتی ہے، جس سے رد عمل کے نظام کے آپریشن کو آسان بنانا اور لاگت کو کم کرنا ناممکن ہو جاتا ہے۔یہاں ہم دو ہائی ٹمپریچر ریزسٹنٹ ریورس ٹرانسکرپٹیس TtH اور RevTaq متعارف کرائیں گے۔ان دونوں انزائمز میں ڈی این اے پولیمریز کا کام بھی ہوتا ہے، اس لیے ان کو دو فنکشنل انزائمز کہا جاتا ہے۔

ٹی ٹی ایچ ڈی این اے پولیمریز

آپ نے TtH کے بارے میں سنا ہوگا، جو تھرموفیلک بیکٹیریم تھرمس ​​تھرموفیلس HB8 سے ماخوذ ہے۔Mg2+ جیسے divalent cations کی موجودگی میں، اس میں DNA پولیمریز سرگرمی ہوتی ہے۔یہ پی سی آر کے رد عمل جیسے طاق انزائم میں بڑے پیمانے پر استعمال ہوتا ہے، لیکن اس میں Taq انزائم سے زیادہ گرمی کی مزاحمت ہوتی ہے، اس لیے یہ اعلی GC مواد کے سانچوں کے ساتھ PCR پر بھی بہتر اثر ڈالتا ہے۔

اس انزائم میں بنیادی طور پر کوئی 3′→5′ exonuclease سرگرمی اور 5′→3′ exonuclease سرگرمی نہیں ہے، اس لیے اسے ڈیڈیوکسی ترتیب کے لیے بھی استعمال کیا جا سکتا ہے۔

اس انزائم میں RTase سرگرمی ہوتی ہے۔Mn2+ کی موجودگی میں، RTase سرگرمی کو بڑھایا جائے گا۔اس خصوصیت کا استعمال کرتے ہوئے، اسے ایک ہی ٹیوب میں ریورس ٹرانسکرپشن ری ایکشن اور پی سی آر ری ایکشن کرنے کے لیے استعمال کیا جا سکتا ہے، یعنی ایک قدمی RT-PCR۔تاہم، Mn2+ کی موجودگی میں، RT-PCR کی درستگی زیادہ نہیں ہے۔RT سرگرمی کا rnaase H سرگرمی سے کوئی تعلق نہیں ہے۔

Tth-DNA پولیمریز کی بڑھتی ہوئی سرگرمی (pH9، زیادہ سے زیادہ +55℃~+70℃، زیادہ سے زیادہ +95℃) RNA کے ثانوی ڈھانچے کی وجہ سے پیدا ہونے والے مسائل پر قابو پاتی ہے۔نتیجے میں آنے والے سی ڈی این اے کو Mg2+ آئنوں کی موجودگی میں اسی انزائم کے ساتھ PCR کے ذریعے بڑھایا جا سکتا ہے۔

Tth-DNA پولیمریز کی اعلی درجہ حرارت پر ریورس ٹرانسکرپشن اور DNA ایمپلیفیکیشن کرنے کی صلاحیت اس انزائم کو مقداری RT-PCR، کلوننگ، اور سیلولر اور وائرل RNA کے جین اظہار کے تجزیہ کے لیے مفید بناتی ہے۔
RT-PCR کے لیے Tth-DNA پولیمریز کا استعمال RNA کو 1kb تک بڑھانے کے لیے کیا جاتا ہے۔

خالی
 

خصوصیات اور فوائد

Tth DNA پولیمریز:

• یقینی بنائیں کہ آپٹمائزڈ پولیمریز چین ری ایکشن (PCR) پروڈکٹ سائز، RT-PCR ری ایکشن میں کم از کم 1000 bp

ترمیم شدہ ڈی آکسیریبونیوکلیوسائیڈ ٹرائی فاسفیٹ کو بطور سبسٹریٹ قبول کریں۔

• RNase H سرگرمی سے متعلق نہیں ہے۔

• مسائل پر قابو پانے کے لیے اعلی تھرمل استحکام ہے، عام طور پر RNA میں موجود ہائی سیکنڈری ڈھانچے سے متعلق

RevTaq RT-PCR DNA پولیمریز

ریورس ٹرانسکرپٹیس سرگرمی کے ساتھ گرمی سے بچنے والا DNA پولیمریز

RevTaq-RT-PCR-DNA پولیمریز ایک انجنیئرڈ، انتہائی گرمی سے بچنے والا، دوہری فنکشنل انزائم ہے جس میں ریورس ٹرانسکرپٹیس اور DNA پولیمریز سرگرمیاں ہدایت اور مصنوعی ارتقاء کے ذریعے حاصل کی جاتی ہیں۔

RevTaq RT-PCR DNA پولیمریز کی 95°C پر نصف زندگی 40 منٹ سے زیادہ ہے۔

RevTaq RT-PCR DNA پولیمریز براہ راست RNA ٹیمپلیٹ سے اعلی درجہ حرارت کے ریورس ٹرانسکرپشن کی اجازت دیتا ہے، اور مزید cDNA ٹیمپلیٹس تیار کرنے کے لیے ریورس ٹرانسکرپشن مرحلہ متعدد بار دہرایا جا سکتا ہے۔

RevTaq RT-PCR DNA پولیمریز "zero-step" RT-PCR (کوئی isothermal ریورس ٹرانسکرپشن مرحلہ نہیں) کی اجازت دیتا ہے، کیونکہ سائیکلک PCR ایکسٹینشن سٹیپ میں، ریورس ٹرانسکرپشن اور DNA ایمپلیفیکیشن ایک ساتھ ہوتے ہیں۔یہ اعلی درجہ حرارت پر ریورس ٹرانسکرپشن ردعمل کو بھی فروغ دیتا ہے، اس طرح اعلی درجہ حرارت پر RNA میں مضبوط ثانوی ڈھانچے کو پگھلنے میں درپیش مسائل کو کم کرتا ہے۔

اپٹیمر پر مبنی ہاٹ سٹارٹ فارمولے کی وجہ سے، RevTaq RT-PCR DNA پولیمریز اس وقت بہتر نتائج پیدا کرے گا جب اینیلنگ اور ایکسٹینشن کا درجہ حرارت 57°C سے زیادہ ہو گا۔

· چونکہ انزائم گرمی سے بچنے والا ہے، اس لیے پرائمر اور تحقیقات کو بہت زیادہ پگھلنے والے پوائنٹس (>60°C) کے ساتھ ڈیزائن کرنے کی سفارش کی جاتی ہے۔

· رد عمل کے سیٹ اپ کے عمل کے دوران درجہ حرارت کے میلان کے ذریعے اینیلنگ/توسیع قدم کے درجہ حرارت کو بہتر بنانے کی سفارش کی جاتی ہے۔

· درجہ حرارت جتنا زیادہ ہوگا، پی سی آر کی خصوصیت اتنی ہی زیادہ ہوگی۔ریورس ٹرانسکرپشن سائیکل عام طور پر پی سی آر سائیکل سے زیادہ درجہ حرارت پر انجام دیا جاتا ہے، کیونکہ ڈی این اے پرائمر: آر این اے ٹیمپلیٹ ہائبرڈائزیشن میں عام طور پر ڈی این اے پرائمر: سی ڈی این اے ٹیمپلیٹ ڈوپلیکس سے زیادہ پگھلنے کا مقام ہوتا ہے۔

RevTaq RT-PCR DNA پولیمریز جینیاتی طور پر انجینیئرڈ اور آپٹمائزڈ ہے، اور ایمپلیکن سائز 60-300 bp کے درمیان ہے۔

RevTaq RT-PCR DNA پولیمریز کا پتہ لگانے کی حد 4 کاپیاں تک پہنچ گئی/دو (2)

آپٹمائزڈ ری ایکشن سسٹم (اعلی پگھلنے والے پوائنٹ پرائمر کا قیام) تصویر میں دکھایا گیا ہے۔RevTaq RT-PCR DNA پولیمریز سے چلنے والا RT-PCR TaqPath 1-اسٹیپ RT-qPCR ماسٹر مکس سے بہتر حساسیت کو ظاہر کرتا ہے، اور کم پتہ لگانے کا نمونہ کم کرنے والے گریڈینٹ۔

مزید فوائد:

فوری آغاز کا فنکشن → ابتدائی تھرمل ڈینیچریشن سٹیپ کو چھوڑا جا سکتا ہے۔

ہاٹ سٹارٹ اپٹیمر فارمولا → 100% انزائم کی سرگرمی فوری طور پر فراہم کریں اور کم درجہ حرارت (<57°C) پر غیر مخصوص امپلیفیکیشن کو روکیں۔

کلیویج فنکشن → RNA نکالنے کا مرحلہ چھوڑ دیا گیا ہے، کیونکہ RevTaq RT-PCR DNA پولیمریز خام رد عمل کے نمونوں پر بھی کارروائی کر سکتا ہے۔یہ گرم RT-PCR سائیکل میں یوکرائٹس، بیکٹیریا اور وائرس کی سیل جھلیوں کو فوری طور پر تباہ کر سکتا ہے۔

IVD خام مال کی سطح → اعلی معیار کے معیار اور انتہائی مسابقتی قیمتیں۔


پوسٹ ٹائم: اگست 12-2021