لیبارٹری ٹیسٹنگ نمونے جمع کرنے کے ساتھ شروع ہوتی ہے، اور نمونہ جمع کرنا نظر انداز کرنا سب سے آسان ہے۔نمونہ جمع کرنے کے لیے سب سے اہم چیز نمونہ کی صحیح قسم کا انتخاب کرنا، نمونے لینے کے مناسب اوزار استعمال کرنا، اور مناسب نقل و حمل اور پروسیسنگ کرنا ہے۔

I. نمونہ کی قسم

عام نمونے کی اقسام مندرجہ ذیل ہیں:

نمونے لینے کا طریقہ زرعی تجارت (بازار) مارکیٹ میں نئے کورونا وائرس کی ماحولیاتی نگرانی کے لیے تکنیکی خصوصیات کا حوالہ دے سکتا ہے۔

1. گلے کے جھاڑو، ہاتھوں، کپڑوں اور پریکٹیشنرز کے دیگر اشیاء سے جھاڑو کے نمونے: وائرس کے نمونے لینے والی ٹیوب میں وائرس سے بچاؤ کا محلول استعمال کرنا اور نمونے لینے والے کپاس کے جھاڑیوں میں مکمل طور پر گھسنا ضروری ہے۔زمین کی سطح) کو بار بار لاگو کیا جاتا ہے اور 3 سے زیادہ بار دھویا جاتا ہے۔ایک ہی وقت میں، نمونہ دار آبجیکٹ کی سطح پر کثیر نکاتی تقسیم شدہ نمونے لینے کی ضرورت ہے۔

2. کھانے کی سطح کے جھاڑو کے نمونے: خوراک کے نمونے براہ راست جمع نہیں کیے جا سکتے۔جمع کی جانے والی خوراک کو احتیاط سے الگ کیا جانا چاہیے اور جھاڑو کے نمونے جمع کرنے سے پہلے ایک صاف سیمپلنگ بیگ میں محفوظ کرنا چاہیے۔وائرس کے نمونے لینے والی ٹیوب میں وائرس سے بچاؤ کے محلول کو استعمال کرنے کی ضرورت ہے، نمونے لینے والے روئی کے جھاڑو کو مکمل طور پر بھگونے کے بعد، کھانے کے نمونے کی سطح کو 3 سے زائد مرتبہ جمع کرنے کے لیے بار بار سمیر اور کللا کرنا ضروری ہے۔ایک ہی وقت میں، نمونے کی سطح پر کثیر نکاتی تقسیم شدہ نمونے لینے کی ضرورت ہے۔

3. سیوریج کے نمونے: مارکیٹ میں نکاسی آب کے نظام کی تقسیم کے مطابق، 2-3 سیوریج کے نمونے لینے کے مقامات کا انتخاب کریں، اندرونی پائپ نیٹ ورک جمع کرنے، پانی کے بہاؤ کی سمت کے نیچے کی طرف، یا میونسپل پائپ نیٹ ورک کے ساتھ تعلق پر توجہ مرکوز کریں۔جھاڑو کے نمونے کو جمع کرنے کے لیے، اسے سیوریج میں ڈبو دیں اور نمونے لینے والے روئی کے جھاڑو کے ساتھ اس سے سیوریج جذب ہو جائے اور اسے سیمپلنگ ٹیوب میں 3 بار سے زیادہ دھو لیں۔سیوریج کے نمونے جمع کرنے کے لیے، 30-500 ملی لیٹر سیوریج کے پانی کے نمونے جمع کرنے کے لیے پولی تھیلین پلاسٹک کی بوتلیں استعمال کریں۔500 ملی لیٹر سے زیادہ حجم کے ساتھ سیوریج جمع کرنے کے لیے، پولی تھیلین پلاسٹک کی بالٹیاں یا سائٹ پر موجود پانی کے نمونے کی افزودگی کا خصوصی سامان استعمال کیا جا سکتا ہے۔ایک ہی وقت میں، سیوریج کے نمونے لینے کے مقام کے لیے کثیر نکاتی تقسیم شدہ نمونے لینے کی ضرورت ہے۔

4. جانوروں کے نمونے: زندہ جانوروں کے لیے، نمونے لینے والے جھاڑو کا استعمال جسم کی سطح کے جھاڑو، oropharyngeal swabs اور anal swabs کو جمع کرنے کے لیے کیا جا سکتا ہے، اور اخراج یا رطوبت کے نمونے بھی جمع کیے جا سکتے ہیں اور اسی کے مطابق ریکارڈ شیٹ پر ریکارڈ کیے جا سکتے ہیں۔ان جانوروں کے نمونوں کے لیے جن کی کھال اتاری گئی ہے، وغیرہ، ان کے جسم کی سطح اور جسم کی گہا کے جھاڑو کے نمونے جمع کرنے کے لیے روئی کے جھاڑو کا استعمال کریں۔وائرس کے نمونے لینے والی ٹیوب میں وائرس کے تحفظ کے محلول کو استعمال کرنے کی ضرورت ہے تاکہ نمونے لینے والے کپاس کے جھاڑو کو مکمل طور پر گھس سکیں، اور پھر جمع کیے جانے والے کھانے کے نمونے کی سطح پر اطلاق کو دہرائیں۔شبو 3 سے زیادہ بار۔ایک ہی وقت میں، نمونے کی سطح پر کثیر نکاتی تقسیم شدہ نمونے لینے کی ضرورت ہے۔

5. دیگر آلات: جانوروں کی نقل و حمل اور افزائش کے لیے کنٹینر جیسے پنجرے یا مچھلی کے ٹینک۔سب سے پہلے، کنٹینر میں محفوظ اور پالے گئے جانوروں کی مخصوص اقسام کا مشاہدہ کریں یا سمجھیں، اور کنٹینر کی اندرونی دیوار پر جھاڑو کے نمونے یا مواد کے مائع نمونے جمع کریں۔

6. ایروسول کے نمونے ان علاقوں میں جمع کریں جہاں لوگ جمع ہوتے ہیں، خراب ہوادار مقامی تجارتی علاقوں، دفاتر اور آرام کے کمرے۔

II. نمونے لینے کے اوزار
1. خون جمع کرنے والی ٹیوب
اگر آپ کو بعد میں نیوکلک ایسڈ کی جانچ اور اینٹی کوگولنٹ کے نمونے لینے کی ضرورت ہو تو، خون جمع کرنے کے لیے ای ڈی ٹی اے اینٹی کوگولنٹ پر مشتمل ویکیوم خون کی نالی کا استعمال کرنے کی سفارش کی جاتی ہے۔سیرم کے نمونوں کے لیے، اینٹی کوگولنٹ کے بغیر ویکیوم خون کی نالی کا استعمال کرنے کی سفارش کی جاتی ہے۔

2. نمونے لینے والی جھاڑو

یہ تجویز کی جاتی ہے کہ کیلشیم الجنیٹ کے جھاڑیوں کے بجائے پولی پروپیلین جھاڑو یا لکڑی کے کھمبوں کے ساتھ جھاڑو استعمال کریں، کیونکہ ان میں ایسے مادے ہوسکتے ہیں جو بعض وائرسوں کو غیر فعال کرتے ہیں اور پی سی آر ٹیسٹنگ کو روکتے ہیں۔روئی کے سروں کے ساتھ جھاڑیوں کا استعمال نہیں کیا جا سکتا، کیونکہ روئی کے ریشوں میں پروٹین کا مضبوط جذب ہوتا ہے اور بعد میں محفوظ کرنے والے محلول میں آسانی سے نہیں ڈالا جاتا۔

"نئے کورونا وائرس نیوکلک ایسڈز کے 10-ان-1 مکسڈ اکٹھا کرنے اور پتہ لگانے کے لیے تکنیکی تفصیلات" میں، یہ واضح طور پر کہا گیا ہے کہ "نمونہ لینے والے جھاڑو کو پالئیےسٹر، نایلان اور دیگر نان کاٹن اور نان کیلشیم الگنیٹ مواد سے بنایا جانا چاہیے، اور ہینڈل کو لکڑی سے بنایا جانا چاہیے۔بریکنگ پوائنٹ جھاڑو کے سر کے اوپر سے تقریباً 3 سینٹی میٹر کے فاصلے پر ہے، جسے توڑنا آسان ہے۔"

ریاستہائے متحدہ میں سی ڈی سی نے یہ بھی بتایا کہ "پلاسٹک یا تار شافٹ کے ساتھ صرف مصنوعی فائبر جھاڑو استعمال کریں۔لکڑی کے شافٹ کے ساتھ کیلشیم الجنیٹ swabs اورswabs استعمال نہ کریں،کیونکہ ان میں ایسے مادے ہوسکتے ہیں جو کچھ وائرس کو غیر فعال کرتے ہیں اور پی سی آر ٹیسٹنگ کو روکتے ہیں۔

فی الحال بڑے پیمانے پر استعمال کیا جاتا ہے ایک ڈسپوزایبل جراثیم سے پاک نایلان فلاکنگ جھاڑو کو پلاسٹک کی چھڑی کے ساتھ ملا کر۔فلاکنگ جھاڑو میں بہتر پانی جذب اور رہائی کی شرح ہوتی ہے۔نمونے لینے کی مختلف سائٹوں کے مطابق، جھاڑو کے سر میں بھی مختلف سائز اور ریشے ہوتے ہیں۔موٹائی۔"

3. نقل و حمل کے تحفظ کا نمونہ حل

وائرس کے غیر فعال ہونے سے بچاؤ کا حل: گوانائیڈائن نمک کی ایک مناسب مقدار اور مختلف قسم کے وائرس لیسز اجزاء نیوکلک ایسڈ کو چھوڑنے، RNase اور DNase کو غیر فعال کرنے، اور نیوکلک ایسڈ کی سالمیت کو یقینی بنانے کے لیے براہ راست وائرس کو لیس کر سکتے ہیں، جو کہ بعد میں کیو پی سی آر کا پتہ لگانے کے لیے استعمال کیا جا سکتا ہے۔اسے وائرس کی کاشت اور تنہائی کے لیے استعمال نہیں کیا جا سکتا۔

وائرس کی نقل و حمل اور تحفظ کا حل: اس میں نمکیات، امینو ایسڈز، وٹامنز، گلوکوز اور وائرس کی بقا کے لیے ضروری پروٹین ہوتے ہیں، جو وائرس کی سرگرمی کو برقرار رکھ سکتے ہیں۔اسے مستقبل میں نیوکلک ایسڈ نکالنے اور وائرس کا پتہ لگانے کے لیے استعمال کیا جا سکتا ہے، اور اسے وائرس کی کاشت اور علیحدگی کے لیے بھی استعمال کیا جا سکتا ہے۔

4. نمونہ تحفظ ٹیوب اور نمونہ بیگ

نمونہ ذخیرہ کرنے والی ٹیوب ایک جراثیم سے پاک پلاسٹک ٹیوب ہونی چاہیے جس میں اسکرو ٹوپی ہو جو نیوکلک ایسڈ کو جذب نہ کرے۔نمونے کے رساو اور آلودگی کو روکنے کے لیے ہر نمونے کی ٹیوب کو نمونے کے تھیلے سے ڈھانپنا چاہیے۔

III.نمونے میں مداخلت کرنے والے مادے

PCR تجربات میں مداخلت کرنے والے مادے

1. endogenous interferent

جسم کے نمونے میں موجود مادے دوسرے مادوں کی کھوج میں مداخلت کر سکتے ہیں۔

خون:ہیم (>1mg/ml)، hemin (>0.1ng/μl)، ٹرائگلیسرائڈز، IgG، وغیرہ؛

پیشاب:یوریا (20 ملی میٹر)؛

پاخانہ:پلانٹ پولی سیکرائڈز، چولیٹ؛

ٹشو:پروٹیز، کولیجن؛

دودھ: پروٹیز، کیلشیم آئن؛

منشیات: اینٹی بائیوٹکس، اینٹی وائرل ادویات، ہارمونز وغیرہ۔

دوسرے

2. خارجی مداخلت کرنے والا

یہ ان مادوں سے آتا ہے جو وٹرو میں دوسرے مادوں کی کھوج میں مداخلت کر سکتے ہیں۔نمونے کے اضافے اور مادے جن سے نمونہ جمع کرنے اور پروسیسنگ کے دوران رابطہ کیا جاسکتا ہے:

ٹیسٹ کی فراہمی: سیرم سیپریشن جیل، نمونہ جمع کرنے والا کنٹینر اور ربڑ کا روکنے والا، کیتھیٹر، کیتھیٹر فلشنگ فلوئڈ، گلوو پاؤڈر وغیرہ۔

مانعِ انجماد: ہیپرین (>0.1 U/mL)، EDTA (>0.5 mM)، وغیرہ؛

نامیاتی سالوینٹس: isopropanol (>0.1 IU/ml)، betaine، dimethyl sulfoxide، formamide، glycerin، PEG، وغیرہ؛

جراثیم کش: الکوحل (ایتھنول>1%)، الڈیہائڈز، فینول (فینول>0.2%)، پیرو آکسائیڈز، مضبوط تیزاب (HCL)، مضبوط الکلیس (NaOH)، وغیرہ؛

صابن:SDS (>0.005%)؛

مٹی: Humus

ڈائیسٹف: انڈگو

دوسرے

بیرونی نمونے لینے کے اصل حالات کے تحت، جیسے کہ ماحولیاتی نمونے جمع کرنا، نمونوں میں مختلف قسم کے مداخلت کرنے والے مادوں پر مشتمل ہوسکتا ہے، اور ہر مقام پر مداخلت کرنے والے مادوں کی ساخت مختلف ہوتی ہے، جس کے لیے مقامی حالات کے مطابق PCR مداخلت کے تجربات کرنے کی ضرورت ہوتی ہے۔

چہارمنمونہ اسٹوریج اور نقل و حمل کے حالات

تازہ جمع کیے گئے طبی نمونوں کو 2°C سے 8°C پر جمع کرنے کے بعد 2 سے 4 گھنٹے کے اندر لیبارٹری میں بھیج دیا جانا چاہیے۔24 گھنٹے کے اندر اندر 4℃ پر اسٹور کریں۔وائرس کی تنہائی اور نیوکلک ایسڈ کا پتہ لگانے کے لیے استعمال ہونے والے نمونوں کی جلد از جلد جانچ کی جانی چاہیے۔24 گھنٹوں کے اندر ٹیسٹ کیے جانے والے نمونوں کو 4 ° C پر ذخیرہ کیا جا سکتا ہے۔جن نمونوں کا 24 گھنٹوں کے اندر اندر پتہ نہیں چل سکتا ہے انہیں -70 ° C یا اس سے کم پر ذخیرہ کیا جانا چاہئے (اگر نہیں- 70 ° C پر فریج میں -20 ° C پر اسٹور کریں)۔

خلاصہ:نمونوں کا معیاری مجموعہ، نقل و حمل اور ذخیرہ کرنا بعد کی جانچ کے لیے ضروری ہے۔بہت سے لیبارٹری ٹیسٹوں کے غلط منفی نمونے جمع کرنے، نقل و حمل اور ذخیرہ کرنے کی وجہ سے ہوتے ہیں جو وائرل نیوکلک ایسڈ کے انحطاط کا باعث بنتے ہیں۔تاہم، بہت سی لیبارٹریز اب بھی نمونے لینے کی اہمیت کو نظر انداز کرتی ہیں۔مجھے امید ہے کہ یہ مضمون نمونے لینے کی طرف سب کی توجہ بیدار کر سکتا ہے اور مزید سائنسی اور معقول نمونے لینے کا باعث بن سکتا ہے!

متعلقہ مصنوعات:

SARS-CoV-2 ویرینٹ نیوکلک ایسڈ ڈیٹیکشن کٹ (I) (ملٹی پلیکس پی سی آر فلوروسینٹ پروب میتھڈ) - برازیل، جنوبی افریقہ اور برطانیہ سے اتپریورتیوں کی کھوج کے لیے