Ⅰ. رد عمل کے نظام کی حساسیت میں اضافہ:
1. اعلیٰ معیار کا RNA الگ کریں:
سی ڈی این اے کی کامیاب ترکیب اعلیٰ معیار کے آر این اے سے آتی ہے۔اعلیٰ معیار کے RNA کو کم از کم کل لمبا یقینی بنانا چاہیے اور اس میں ایسے روکنے والے نہیں ہوتے جن میں ریکارڈنگ انزائمز شامل نہ ہوں، جیسے EDTA یا SDS۔آر این اے کا معیار ترتیب کی معلومات کی زیادہ سے زیادہ قدر کا تعین کرتا ہے جسے آپ cDNA میں نقل کر سکتے ہیں۔عام RNA صاف کرنے کا طریقہ isoocyanate/acidophenol استعمال کرنے کا ایک مرحلہ وار طریقہ ہے۔RNase کی آلودگی کو روکنے کے لیے، RNase (جیسے لبلبہ) سے بھرپور نمونے سے الگ ہونے والے RNA کو اعلیٰ معیار کے RNA کو بچانے کے لیے formaldehyde کو ذخیرہ کرنے کی ضرورت ہوتی ہے، جو طویل مدتی ذخیرہ کرنے کے لیے اور بھی زیادہ ہے۔چوہے کے جگر سے نکالا گیا RNA بنیادی طور پر پانی میں ذخیرہ کرنے کے ایک ہفتے کے بعد کم ہو گیا تھا، جبکہ چوہے کی تلی سے نکالا گیا RNA تین سال تک پانی میں ذخیرہ کرنے کے بعد مستحکم رہا۔اس کے علاوہ، 4kb سے بڑی نقلیں چھوٹی نقلوں کے مقابلے RNase کے انحطاط کو ٹریس کرنے کے لیے زیادہ حساس ہوتی ہیں۔ذخیرہ کرنے والے آر این اے نمونے کی استحکام کو بڑھانے کے لیے، آر این اے کو آئن کے میتھالمامین میں تحلیل کیا جا سکتا ہے، اور اسے -70 ° C پر ذخیرہ کیا جاتا ہے۔RNA کو بچانے کے لیے استعمال ہونے والے Thylide میں ایسی متفرق چیز نہیں ہونی چاہیے جو RNA کو کم کرتی ہو۔آر این اے، جو لبلبہ سے اخذ کیا جاتا ہے، کم از کم ایک سال کے لیے میتھالمائن میں محفوظ کیا جا سکتا ہے۔جب آپ RNA استعمال کرنے کے لیے تیار ہوں، تو آپ RNA کو تیز کرنے کے لیے درج ذیل طریقے استعمال کر سکتے ہیں: NaCl کو 0.2m اور ایتھنول کے حجم سے 4 گنا، کمرے کا درجہ حرارت 3-5 منٹ کے لیے رکھیں، اور 5 منٹ کے لیے 10,000 × g سینٹری فیوگل۔
2. RNaseH سرگرمی کے بغیر ریورس ٹرانسکرپٹ استعمال کریں (RNaseH-):
RNase inhibitors کو اکثر الٹ ٹرانسکرپشن ری ایکشنز میں شامل کیا جاتا ہے تاکہ cDNA کی ترکیب کی لمبائی اور پیداوار کو بڑھایا جا سکے۔RNase inhibitor کو پہلے چین کی ترکیب کے رد عمل میں بفرز اور کم کرنے والے ایجنٹوں جیسے DTT کی موجودگی میں شامل کیا جاتا ہے کیونکہ سی ڈی این اے سے پہلے کی ترکیب کا عمل روکتا ہے، اس طرح پابند RNase جاری کرتا ہے جو RNA کو کم کرتا ہے۔Protein RNase inhibitor صرف RNase A, B, C کے ذریعے RNA کے انحطاط کو روکتا ہے اور جلد پر RNases کو نہیں روکتا، اس لیے اس بات کا خیال رکھنا چاہیے کہ ان inhibitors کے استعمال کے باوجود RNases کو انگلیوں سے متعارف نہ کیا جائے۔
ریورس ٹرانسکرپٹیس آر این اے کو سی ڈی این اے میں تبدیل کرنے کو متحرک کرتا ہے۔M-MLV اور AMV دونوں میں ان کی اپنی پولیمریز سرگرمی کے علاوہ اینڈوجینس RNaseH سرگرمی ہے۔RNaseH سرگرمی RNA ٹیمپلیٹس اور DNA پرائمر یا cDNA ایکسٹینشن اسٹرینڈز کے درمیان بننے والے heterozygous strands کے لیے پولیمریز کی سرگرمی سے مقابلہ کرتی ہے، اور RNA کو کم کرتی ہے: DNA کمپلیکس میں RNA strands۔RNaseH سرگرمی کے ذریعے تنزلی شدہ RNA ٹیمپلیٹس کو اب cDNA کی ترکیب کے لیے موثر ذیلی ذخیرے کے طور پر استعمال نہیں کیا جا سکتا، جس سے cDNA کی ترکیب کی پیداوار اور لمبائی کم ہو جاتی ہے۔اس طرح ریورس ٹرانسکرپٹیس کی RNaseH سرگرمی کو ختم کرنا یا بہت زیادہ کم کرنا بہت فائدہ مند ہوگا۔
SuperScriptⅡ ریورس ٹرانسکرپٹیس، RNaseH کے MMLV ریورس ٹرانسکرپٹیس- اور thermoScript ریورس ٹرانسکرپٹیس، RNaseH کے AMV- نے MMLV اور AMV سے زیادہ مکمل لمبائی والا cDNA حاصل کیا۔RT-PCR کی حساسیت سی ڈی این اے کی ترکیب کی مقدار سے متاثر ہوتی ہے۔ThermoScript AMV سے زیادہ حساس ہے۔RT-PCR مصنوعات کا سائز سی ڈی این اے کی ترکیب کے لیے ریورس ٹرانسکرپٹیس کی صلاحیت سے محدود ہوتا ہے، خاص طور پر جب بڑے سی ڈی این اے کی کلوننگ کی جاتی ہے۔MMLV کے مقابلے میں، SuperScripⅡ نے طویل RT-PCR مصنوعات کی پیداوار میں نمایاں اضافہ کیا۔RNaseH- کی ریورس ٹرانسکرپٹیس بھی تھرمل استحکام کو بڑھاتا ہے، لہذا رد عمل 37-42℃ کے معمول سے زیادہ درجہ حرارت پر کیا جا سکتا ہے۔تجویز کردہ ترکیب کی شرائط کے تحت، oligo (dT) پرائمر اور 10μCi [alpha-p]dCTP استعمال کیے گئے تھے۔پہلی زنجیر کی کل پیداوار کا حساب TCA بارش کے طریقہ کار سے لگایا گیا تھا۔مکمل لمبائی والے سی ڈی این اے کا تجزیہ سائز کے مطابق پٹی کو ہٹانے اور الکلائن ایگروز جیل میں گنتی کا استعمال کرتے ہوئے کیا گیا۔
3. ریورس ٹرانسکرپشن کے گرمی کے تحفظ کے درجہ حرارت میں اضافہ کریں:
زیادہ درجہ حرارت RNA کے ثانوی ڈھانچے کو کھولنے اور ردعمل کی پیداوار کو بڑھانے میں مدد کرتا ہے۔زیادہ تر RNA ٹیمپلیٹس کے لیے، RNA اور پرائمر کو 65°C پر بفر یا نمک کے بغیر رکھنا اور پھر انہیں برف پر جلدی سے ٹھنڈا کرنا زیادہ تر ثانوی ڈھانچے کو ختم کرتا ہے اور پرائمر کو باندھنے دیتا ہے۔تاہم، کچھ ٹیمپلیٹس میں تھرمل ڈینیچریشن کے بعد بھی ثانوی ڈھانچہ ہوتا ہے۔تھرمو اسکرپٹ ریورس ٹرانسکرپٹیس کا استعمال کرتے ہوئے ان مشکل ٹیمپلیٹس کو بڑھاوا دیا جا سکتا ہے اور امپلیفیکیشن کو بہتر بنانے کے لیے ریورس ٹرانسکرپٹیس ری ایکشن کو زیادہ درجہ حرارت پر رکھ کر کیا جا سکتا ہے۔زیادہ ہولڈنگ درجہ حرارت بھی مخصوصیت کو بڑھا سکتا ہے، خاص طور پر جب cDNA کی ترکیب جین کے مخصوص پرائمر (GSPS) کا استعمال کرتے ہوئے انجام دی جاتی ہے (باب 3 دیکھیں)۔اگر GSP استعمال کر رہے ہیں، تو یقینی بنائیں کہ پرائمر کی Tm قدر متوقع ہولڈنگ درجہ حرارت کے برابر ہے۔oligo(dT) اور 60℃ سے اوپر کے بے ترتیب پرائمر استعمال نہ کریں۔رینڈم پرائمر کو 60℃ تک بڑھانے سے پہلے 10 منٹ کے لیے 25℃ پر رکھنے کی ضرورت ہے۔زیادہ ریورس ٹرانسکرپشن ٹمپریچر استعمال کرنے کے علاوہ، RNA/پرائمر مکسچر کو 65℃ ڈینیچرنگ ٹمپریچر سے ریورس ٹرانسکرپشن ہولڈنگ ٹمپریچر میں براہ راست منتقل کرکے اور پہلے سے گرم 2× ری ایکشن مکسچر (cDNA تھرمل انیشیشن سنتھیسز) کو شامل کرکے مخصوصیت کو بہتر بنایا جا سکتا ہے۔یہ نقطہ نظر انٹرمولیکولر بیس جوڑی کو روکنے میں مدد کرتا ہے جو کم درجہ حرارت پر ہوتا ہے۔پی سی آر آلے کا استعمال RT-PCR کے لیے درکار بہت سے درجہ حرارت کے سوئچز کو آسان بناتا ہے۔
Tth ہیٹ اسٹیبلائزڈ پولیمریز Mg2+ کی موجودگی میں DNA پولیمریز اور Mn2+ کی موجودگی میں RNA پولیمریز کے طور پر کام کرتا ہے۔یہ 65 ℃ تک گرمی کو روک سکتا ہے۔تاہم، PCR کے دوران Mn2+ کی موجودگی وفاداری کو کم کرتی ہے، جو Tth پولیمریز کو اعلیٰ درستگی کے لیے کم موزوں بناتی ہے، جیسے cDNA کلوننگ۔اس کے علاوہ، Tth ریورس ٹرانسکرپشن میں کم کارگر ہے، جس سے حساسیت کم ہوتی ہے، اور چونکہ ایک ہی انزائم ریورس ٹرانسکرپشن اور پی سی آر انجام دے سکتا ہے، اس لیے ریورس ٹرانسکرپشن کے بغیر کنٹرول ری ایکشنز کو سی ڈی این اے کی ایمپلیفائیڈ مصنوعات کو آلودہ جینومک ڈی این اے سے ممتاز کرنے کے لیے استعمال نہیں کیا جا سکتا۔
4. اضافی جو ریورس ٹرانسکرپشن کو فروغ دیتا ہے:
گلیسرین اور ڈی ایم ایس او سمیت شامل کرنے والے اجزاء کو پہلے سلسلہ کی ترکیب کے رد عمل میں شامل کرنا نیوکلک ایسڈ ڈبل اسٹرینڈ کے استحکام کو کم کر سکتا ہے اور آر این اے کے ثانوی ڈھانچے کو کھول سکتا ہے۔SuperScriptⅡ یا MMLV کی سرگرمی کو متاثر کیے بغیر 20% گلیسرین یا 10% DMSO شامل کیا جا سکتا ہے۔AMV سرگرمی کو کم کیے بغیر 20% تک گلیسرول کو بھی برداشت کر سکتا ہے۔SuperScriptⅡ ریورس ٹرانسکرپشن ری ایکشن میں RT-PCR کی حساسیت کو زیادہ سے زیادہ کرنے کے لیے، 10% گلیسرول کو شامل کیا جا سکتا ہے اور 45℃ پر موصل کیا جا سکتا ہے۔اگر پی سی آر میں 1/10 ریٹروٹرانکرپشن ری ایکشن پروڈکٹ کو شامل کیا جائے تو ایمپلیفیکیشن ری ایکشن میں گلیسرول کا ارتکاز 0.4% ہے، جو پی سی آر کو روکنے کے لیے کافی نہیں ہے۔
5. RNaseH پروسیسنگ:
PCR سے پہلے RNaseH کے ساتھ cDNA ترکیب کے رد عمل کا علاج کر کے حساسیت کو بہتر بنایا جا سکتا ہے۔کچھ ٹیمپلیٹس کے لیے، یہ خیال کیا جاتا ہے کہ سی ڈی این اے کی ترکیب کے رد عمل میں آر این اے ایمپلیفائیڈ مصنوعات کے پابند ہونے سے روکتا ہے، ایسی صورت میں RNaseH علاج حساسیت کو بڑھا سکتا ہے۔عام طور پر، نسبتاً طویل مکمل لمبائی والے سی ڈی این اے ٹارگٹ ٹیمپلیٹ کو بڑھاوا دینے کے لیے RNaseH علاج کی ضرورت ہوتی ہے، جیسے کہ کم نقل کے ساتھ ٹیوبرس شیروسیسⅡ۔اس مشکل ٹیمپلیٹ کے لیے، RNaseH نے SuperScriptⅡ یا AMV کے ذریعے ترکیب کردہ cDNA کے ذریعے پیدا ہونے والے سگنل کو بڑھایا۔زیادہ تر RT-PCR رد عمل کے لیے، RNaseH علاج اختیاری ہے کیونکہ 95℃ موصل پی سی آر ڈینیچریشن مرحلہ عام طور پر RNA: DNA کمپلیکس سے RNA کو ہائیڈولائز کرتا ہے۔
6. RNA کی چھوٹی مقدار کا پتہ لگانے کے لیے بہتر طریقے:
RT-PCR خاص طور پر مشکل ہوتا ہے جب صرف تھوڑی مقدار میں RNA دستیاب ہو۔RNA علیحدگی کے دوران ایک کیریئر کے طور پر گلائکوجن کا اضافہ چھوٹے نمونوں کی پیداوار کو بڑھانے میں مدد کرتا ہے۔ایک RNase فری گلائکوجن کو ایک ہی وقت میں Trizol کے ساتھ شامل کیا جا سکتا ہے۔گلائکوجن پانی میں گھلنشیل ہے اور آر این اے کے ساتھ پانی کے مرحلے میں رہ سکتا ہے تاکہ بعد میں ہونے والی بارش میں مدد مل سکے۔RNase-free glycogen کی تجویز کردہ ارتکاز 50mg ٹشو یا 106 کلچرڈ سیلز سے کم نمونوں کے لیے 250μg/ml ہے۔
SuperScriptⅡ کا استعمال کرتے ہوئے ٹرانسکرپشن کے رد عمل کو ریورس کرنے کے لیے acetylated BSA کا اضافہ حساسیت کو بڑھا سکتا ہے، اور RNA کی تھوڑی مقدار کے لیے، SuperScriptⅡ کی مقدار کو کم کرنے اور RnaseOut نیوکلیز انحیبیٹر کے 40 یونٹس کا اضافہ پتہ لگانے کی سطح کو بہتر بنا سکتا ہے۔اگر RNA علیحدگی میں گلائکوجن کا استعمال کیا جاتا ہے تو، SuperScriptⅡ کا استعمال کرتے ہوئے ٹرانسکرپشن کے رد عمل کو ریورس کرنے کے لیے BSA یا RNase inhibitors کے اضافے کی اب بھی سفارش کی جاتی ہے۔
Ⅱ. RT-PCR کی خصوصیت میں اضافہ کریں۔
1. سی این ڈی اے ترکیب:
پہلے اسٹرینڈ سی ڈی این اے کی ترکیب کو شروع کرنے کے لیے تین مختلف طریقے استعمال کیے جاسکتے ہیں، اور ہر طریقہ کی نسبتی مخصوصیت سی ڈی این اے کی ترکیب کی مقدار اور قسم کو متاثر کرتی ہے۔
رینڈم پرائمر طریقہ تین طریقوں میں سے کم سے کم مخصوص ہے۔مختصر، جزوی لمبائی کا سی ڈی این اے تیار کرنے کے لیے پرائمر کو پوری ٹرانسکرپٹ میں متعدد سائٹوں پر اینیل کیا جاتا ہے۔یہ طریقہ اکثر RNA ٹیمپلیٹس سے 5′ ٹرمینل ترتیب اور cDNA حاصل کرنے کے لیے استعمال کیا جاتا ہے جس میں ثانوی ساختی خطوں کے ساتھ یا ختم کرنے والی سائٹس کے ساتھ جو ریورس ٹرانسکرپٹیس نقل نہیں کر سکتے ہیں۔سب سے لمبا سی ڈی این اے حاصل کرنے کے لیے، ہر آر این اے نمونے میں پرائمر اور آر این اے کا تناسب تجرباتی طور پر طے کرنے کی ضرورت ہے۔بے ترتیب پرائمر کا ابتدائی ارتکاز 50 سے 250 این جی فی 20μl رد عمل کے نظام میں ہوتا ہے۔چونکہ بے ترتیب پرائمر کا استعمال کرتے ہوئے کل RNA سے ترکیب شدہ cDNA بنیادی طور پر رائبوسومل RNA ہے، پولی(A)+RNA کو عام طور پر ٹیمپلیٹ کے طور پر منتخب کیا جاتا ہے۔
اولیگو (ڈی ٹی) کی شروعات بے ترتیب پرائمر سے زیادہ مخصوص ہے۔یہ پولی (A) دم کے ساتھ ہائبرڈائز کرتا ہے جو زیادہ تر یوکرائیوٹک خلیوں میں mRNA کے 3′ سرے پر پایا جاتا ہے۔چونکہ پولی(A)+RNA کل RNA کا تقریباً 1% سے 2% ہے، اس لیے cDNA کی مقدار اور پیچیدگی اس سے کہیں کم ہے کہ اگر بے ترتیب پرائمر استعمال کیے گئے ہوں۔اس کی اعلی خصوصیت کی وجہ سے، oligo(dT) کو عام طور پر RNA سے پرائمر تناسب اور پولی(A)+ کے انتخاب کی اصلاح کی ضرورت نہیں ہوتی ہے۔0.5μg oligo(dT) فی 20μl ری ایکشن سسٹم استعمال کرنے کی سفارش کی جاتی ہے۔oligo(dT)12-18 زیادہ تر RT-PCR کے لیے موزوں ہے۔ThermoScript RT-PCR سسٹم اپنی اچھی تھرمل استحکام کی وجہ سے oligo(dT)20 فراہم کرتا ہے اور زیادہ درجہ حرارت رکھنے کے لیے موزوں ہے۔
جین مخصوص پرائمر (GSP) ریورس ٹرانسکرپشن قدم کے لیے بہترین مخصوص پرائمر ہیں۔GSP ایک antisense oligonucleoside ہے جو RNA منزل کے سلسلے کے ساتھ خاص طور پر ہائبرڈائز کر سکتا ہے، بجائے اس کے کہ تمام Rnas جیسے بے ترتیب پرائمر یا oligo(dT) کو ختم کر سکے۔PCR پرائمر ڈیزائن کرنے کے لیے استعمال ہونے والے قواعد ریورس ٹرانسکرپشن ری ایکشن GSP کے ڈیزائن پر بھی لاگو ہوتے ہیں۔GSP وہی ترتیب ہو سکتا ہے جس طرح mRNA3′ کے آخر میں ایمپلیفیکیشن پرائمر کو اینیل کیا جاتا ہے، یا GSP کو ریورس ایمپلیفیکیشن پرائمر کے ساتھ نیچے کی طرف اینیل کرنے کے لیے ڈیزائن کیا جا سکتا ہے۔کچھ ایمپلیفائیڈ اشیاء کے لیے، کامیاب RT-PCR کے لیے ایک سے زیادہ اینٹی سینس پرائمر ڈیزائن کرنا ضروری ہے کیونکہ ہدف RNA کا ثانوی ڈھانچہ پرائمر کو باندھنے سے روک سکتا ہے۔20μl کے پہلے چین کی ترکیب کے رد عمل کے نظام میں 1pmol antisense GSP استعمال کرنے کا مشورہ دیا جاتا ہے۔
2. ریورس ٹرانسکرپشن کے گرمی کے تحفظ کے درجہ حرارت میں اضافہ کریں:
جی ایس پی کی خصوصیت کا پورا فائدہ اٹھانے کے لیے، ہائی تھرمل استحکام کے ساتھ ریورس ٹرانسکرپٹیس کا استعمال کیا جانا چاہیے۔رد عمل کی سختی کو بڑھانے کے لیے حرارت سے مستحکم ریورس ٹرانسکرپٹیس کو زیادہ درجہ حرارت پر موصل کیا جا سکتا ہے۔مثال کے طور پر، اگر GSP کو 55°C پر اینیل کیا جاتا ہے، تو GSP کی خصوصیت پوری طرح سے استعمال نہیں ہوتی ہے اگر AMV یا M-MLV کا استعمال کرتے ہوئے کم سختی کے ساتھ ریورس ٹرانسکرپشن 37°C پر کیا جاتا ہے۔تاہم، SuperScripⅡ اور ThermoScript 50℃ یا اس سے زیادہ پر رد عمل ظاہر کر سکتے ہیں، جو کم درجہ حرارت پر پیدا ہونے والی غیر مخصوص مصنوعات کو ختم کر دیتا ہے۔زیادہ سے زیادہ مخصوصیت کے لیے، RNA/ پرائمر مکسچر کو پہلے سے گرم 2 x ری ایکشن مکسچر (cDNA ترکیب کی تھرمل شروعات) کے اضافے کے ساتھ 65 ℃ ڈینیچریشن درجہ حرارت سے براہ راست ریورس ٹرانسکرپشن ہولڈنگ درجہ حرارت میں منتقل کیا جا سکتا ہے۔یہ کم درجہ حرارت پر مالیکیولز کے درمیان بیس جوڑی کو روکنے میں مدد کرتا ہے۔پی سی آر آلے کا استعمال RT-PCR کے لیے درکار کئی درجہ حرارت کی منتقلی کو آسان بناتا ہے۔
3. جینومک ڈی این اے آلودگی کو کم کریں:
RT-PCR کے ساتھ ایک ممکنہ مشکل یہ ہے کہ RNA جینومک DNA کو آلودہ کرتا ہے۔بہتر RNA علیحدگی کے طریقوں کا استعمال، جیسے Trizol Reagent، RNA کی تیاریوں میں جینومک DNA آلودگی کو کم کرتا ہے۔جینومک ڈی این اے سے پیدا ہونے والی مصنوعات سے بچنے کے لیے، الٹ ٹرانسکرپشن سے پہلے آلودہ ڈی این اے کو ہٹانے کے لیے آر این اے کو ایمپلیفیکیشن گریڈ DnasⅠ سے علاج کیا جا سکتا ہے۔DNaseⅠ عمل انہضام کو ختم کرنے کے لیے نمونے 10 منٹ کے لیے 2.0mM EDTA میں 65℃ پر رکھے گئے تھے۔ای ڈی ٹی اے میگنیشیم آئنوں کو چیلیٹ کرتا ہے تاکہ میگنیشیم آئن پر منحصر آر این اے ہائیڈولیسس کو روکا جا سکے جو اعلی درجہ حرارت پر ہوتا ہے۔
ایمپلیفائیڈ سی ڈی این اے کو جینوم ڈی این اے ایمپلیفیکیشن پروڈکٹ سے الگ کرنے کے لیے، پرائمر جو الگ الگ ایکسون کے ساتھ الگ سے اینیل کرتے ہیں ڈیزائن کیے جا سکتے ہیں۔سی ڈی این اے سے حاصل کردہ پی سی آر پروڈکٹس آلودہ جینومک ڈی این اے سے حاصل کردہ مصنوعات سے کم ہوں گی۔ریورس ٹرانسکرپشن کے بغیر ایک کنٹرول شدہ تجربہ ہر RNA ٹیمپلیٹ پر بھی کیا جاتا ہے تاکہ یہ معلوم کیا جا سکے کہ آیا کوئی دیا ہوا ٹکڑا جینومک DNA سے ہے یا cDNA سے۔ریورس ٹرانسکرپشن کی غیر موجودگی میں حاصل کردہ PCR مصنوعات جینوم سے اخذ کی گئی ہیں۔
متعلقہ پروڈکٹ
-ایک قدمی کٹ ریورس ٹرانسکرپشن اور پی سی آر کو ایک ہی ٹیوب میں انجام دینے کے قابل بناتی ہے۔اسے صرف ٹیمپلیٹ RNA، مخصوص PCR پرائمر اور RNase-Free ddH شامل کرنے کی ضرورت ہے۔2O.
RNA کا ریئل ٹائم مقداری تجزیہ تیزی سے اور درست طریقے سے کیا جا سکتا ہے۔
-کِٹ ایک منفرد Foregene ریورس ٹرانسکرپشن ریجنٹ اور Foregene HotStar Taq DNA Polymerase کا استعمال کرتی ہے جو ایک منفرد رد عمل کے نظام کے ساتھ مل کر ردعمل کی افادیت اور مخصوصیت کو مؤثر طریقے سے بہتر کرتی ہے۔
-آپٹمائزڈ ری ایکشن سسٹم ری ایکشن کو زیادہ پتہ لگانے کی حساسیت، مضبوط تھرمل استحکام اور بہتر رواداری کا حامل بناتا ہے۔
-جی ڈی این اے کو ہٹانے کی موثر صلاحیت، جو 2 منٹ کے اندر اندر ٹیمپلیٹ میں موجود جی ڈی این اے کو ہٹا سکتی ہے۔
-موثر ریورس ٹرانسکرپشن سسٹم، پہلے اسٹرینڈ سی ڈی این اے کی ترکیب کو مکمل کرنے میں صرف 15 منٹ لگتے ہیں۔
پیچیدہ ٹیمپلیٹس: اعلی GC مواد اور پیچیدہ ثانوی ساخت کے ساتھ ٹیمپلیٹس کو بھی اعلی کارکردگی کے ساتھ تبدیل کیا جا سکتا ہے۔
اعلیٰ حساسیت ریورس ٹرانسکرپشن سسٹم، پی جی لیول ٹیمپلیٹس بھی اعلیٰ معیار کا سی ڈی این اے حاصل کر سکتے ہیں۔
- ریورس ٹرانسکرپشن سسٹم میں تھرمل استحکام زیادہ ہے، زیادہ سے زیادہ رد عمل کا درجہ حرارت 42 ℃ ہے، اور اس میں اب بھی 50 ℃ پر ریورس ٹرانسکرپشن کی اچھی کارکردگی ہے۔
پوسٹ ٹائم: مارچ 07-2023
