A260/A230 کا کم تناسب عام طور پر 230nm پر زیادہ سے زیادہ جذب طول موج کے ساتھ نجاست کی وجہ سے ہوتا ہے۔آئیے دیکھتے ہیں کہ ان نجاستوں میں کیا شامل ہیں:

• عام آلودگی	جذب طول موج	تناسب اثر
  پروٹین	~ 230nm اور 280nm	A کی بیک وقت کمی260/A 280اور اے260/A 280تناسب
  گوانیڈائن نمک	220-240 nm	A کو کم کریں۔260/A 280تناسب
  فینول	~270nm	-
  Trizol	~ 230nm اور 270nm	A کو کم کریں۔260/A 280تناسب
  ای ڈی ٹی اے	~230nm	A کو کم کریں۔260/A 280تناسب
  ایتھنول	230-240 nm	A کو کم کریں۔260/A 280تناسب

 
 
 
عام آلودگیوں کی جذب طول موج اور متضاد قدر

Pروٹین کی آلودگی
پروٹین کی آلودگی کو نیوکلک ایسڈ نکالنے کے عمل میں سب سے عام آلودگی قرار دیا جا سکتا ہے۔پروٹین اوپری پانی کے مرحلے اور نچلے حصے کے درمیان موجود ہے۔نامیاتیمرحلہآلودگی ایک ہی وقت میں A260/A280 اور A260/A230 کے تناسب کو کم کر دے گی، اور A260/A230 کا تناسب A260/A280 کے تناسب سے زیادہ واضح طور پر تبدیل ہو جائے گا۔
بعد کے دورانریورس ٹرانسکرپشنor کیو پی سی آر کے رد عمل, پروٹین کی باقیات انزائم کے کام میں رکاوٹ یا مداخلت کر سکتی ہیں۔.پروٹین کی آلودگی سے بچنے کا بہترین طریقہ یہ ہے کہ سپرنٹنٹ کی خواہش کرتے وقت "زیادہ سے کم، کئی بار تھوڑی مقدار" کے اصول کو ذہن میں رکھیں۔

2. Guanidinium آلودگی
ہائیڈروکلورائیڈ (GuHCl) اور guanidine thiocyanate (GTC) میں پروٹین کو ختم کرنے کا اثر ہوتا ہے، جو کہ نیوکلک ایسڈ نکالنے کے عمل کے دوران خلیے کی جھلیوں کو تیزی سے تباہ کر سکتا ہے، جس سے پروٹین کی خرابی اور بارش ہوتی ہے۔GuHCl اور GTC کی جذب طول موج 220-240 nm کے درمیان ہے، اوربقایا guanidinium نمک A260/A230 کے تناسب کو کم کر دے گا۔.اگرچہ بقایا گیانڈینیم نمک تناسب کو کم کر دے گا،بہاو ​​تجربات پر اثر درحقیقت نہ ہونے کے برابر ہے۔.

3. Trizol آلودگی
Trizol کا بنیادی جزو فینول ہے۔فینول کا بنیادی کام خلیوں کو لیس کرنا اور خلیوں میں پروٹین اور نیوکلک ایسڈ مادوں کو جاری کرنا ہے۔اگرچہ فینول مؤثر طریقے سے پروٹین کو رد کر سکتا ہے، لیکن یہ RNase کی سرگرمی کو مکمل طور پر روک نہیں سکتا۔لہٰذا، 8-ہائیڈروکسیکوئنولائن، guanidine isothiocyanate، β-mercaptoethanol، وغیرہ کو TRIzol میں شامل کیا جاتا ہے تاکہ endogenous اور exogenous RNase کو روکا جا سکے۔
سیلولر RNA نکالتے وقت، Trizol تیزی سے خلیات کو لیس کر سکتا ہے اور خلیات سے نکلنے والے نیوکلیز کو روک سکتا ہے، اور بقایا Trizol A260/A230 کے تناسب کو نمایاں طور پر کم کر دے گا۔
پروسیسنگ کا طریقہ: سینٹرفیوگنگ کرتے وقت، یہ یاد رکھنا چاہیے کہ Trizol میں موجود فینول 4° اور کمرے کے درجہ حرارت کی حالت میں پانی کے مرحلے میں آسانی سے حل ہو جاتا ہے۔

4. ایتھنول کی باقیات
ایتھنول کو آخری عمل میں ڈی این اے کو تیز کرنے کے لیے استعمال کیا جاتا ہے جبکہ نمک کے آئنوں کو تحلیل کرتے ہوئے جو ڈی این اے سے منسلک ہو سکتے ہیں۔سب سے زیادہ کی جذب طول موججذب کی چوٹیایتھنول بھی 230-240 nm پر ہے، جوA260/A230 کا تناسب بھی کم کر دے گا۔.
ایتھنول کی باقیات سے بچنے کا طریقہ حتمی اخراج کے دوران دو بار دہرایا جا سکتا ہے،دھوئیں ہڈelution کے لیے بفر شامل کرنے سے پہلے ایتھنول کو مکمل طور پر بخارات بننے کی اجازت دینے کے لیے دو منٹ کے لیے۔
تاہم، یہ معلوم ہونا چاہیے کہ تناسب آر این اے کے معیار کا صرف ایک تشخیصی اشاریہ ہے۔اگر مذکورہ بالا کارروائیوں کو سختی سے منظم کیا جائے تو، تناسب اور معیاری حد کے درمیان انحراف کا بہاو تجربات پر بہت زیادہ اثر نہیں پڑے گا۔
متعلقہ مصنوعات:
جانوروں کی ٹوٹل آر این اے آئسولیشن کٹ
پلانٹ ٹوٹل آر این اے آئسولیشن کٹ
سیل ٹوٹل آر این اے آئسولیشن کٹ
پلانٹ ٹوٹل آر این اے آئسولیشن کٹ پلس