RT-qPCR کو عام PCR ٹیکنالوجی سے تیار کیا گیا ہے۔یہ روایتی پی سی آر ری ایکشن سسٹم میں فلوروسینٹ کیمیکلز (فلوریسنٹ رنگ یا فلوروسینٹ پروبس) کا اضافہ کرتا ہے، اور پی سی آر اینیلنگ اور ایکسٹینشن کے عمل کو ان کے مختلف لومینسینٹ میکانزم کے مطابق حقیقی وقت میں تلاش کرتا ہے۔میڈیم میں فلورسنٹ سگنل کی تبدیلیوں کا استعمال پی سی آر کے ہر چکر میں مصنوعات کی تبدیلی کی مقدار کا حساب لگانے کے لیے کیا جاتا ہے۔فی الحال، سب سے عام طریقے فلوروسینٹ ڈائی طریقہ اور تحقیقات کا طریقہ ہیں۔

فلوروسینٹ رنگنے کا طریقہ:
کچھ فلوروسینٹ رنگ، جیسے SYBR گرین Ⅰ، PicoGreen، BEBO، وغیرہ، خود روشنی نہیں خارج کرتے ہیں، لیکن dsDNA کی معمولی نالی سے منسلک ہونے کے بعد فلوروسینس خارج کرتے ہیں۔لہذا، پی سی آر ردعمل کے آغاز میں، مشین فلوروسینٹ سگنل کا پتہ نہیں لگا سکتا.جب رد عمل اینیلنگ ایکسٹینشن (دو قدمی طریقہ) یا توسیعی مرحلے (تین قدمی طریقہ) کی طرف بڑھتا ہے، تو اس وقت ڈبل اسٹرینڈز کھل جاتے ہیں، اور نئے ڈی این اے پولیمریز اسٹرینڈ کی ترکیب کے دوران، فلوروسینٹ مالیکیولز dsDNA معمولی نالی میں اکٹھے ہوتے ہیں اور fluoresc خارج کرتے ہیں۔جیسے جیسے PCR سائیکلوں کی تعداد میں اضافہ ہوتا ہے، زیادہ سے زیادہ رنگ dsDNA کے ساتھ مل جاتے ہیں، اور فلوروسینٹ سگنل کو بھی مسلسل بڑھایا جاتا ہے۔مثال کے طور پر SYBR گرین Ⅰ لیں۔
تحقیقات کا طریقہ:
تقمان پروب سب سے زیادہ استعمال ہونے والی ہائیڈولیسس پروب ہے۔تحقیقات کے 5′ سرے پر ایک فلوروسینٹ گروپ ہوتا ہے، عام طور پر FAM۔تحقیقات بذات خود ہدف جین کی تکمیلی ترتیب ہے۔فلوروفور کے 3′ سرے پر فلوروسینٹ بجھانے والا گروپ ہے۔فلوروسینس ریزوننس انرجی ٹرانسفر (Förster resonance energy transfer, FRET) کے اصول کے مطابق، جب رپورٹر فلوروسینٹ گروپ (عطیہ کنندہ فلوروسینٹ مالیکیول) اور بجھانے والا فلوروسینٹ گروپ (قبول کرنے والا فلوروسینٹ مالیکیول) جب ایکسائٹیشن اسپیکٹرم اوورلیپ ہو جاتا ہے اور فاصلہ بہت قریب ہو جاتا ہے، تو فاصلہ بہت قریب ہو سکتا ہے۔ قبول کرنے والے مالیکیول کا فلوروسینس، جبکہ آٹو فلوروسینس کمزور ہو جاتا ہے۔لہذا، پی سی آر ردعمل کے آغاز میں، جب تحقیقات آزاد اور نظام میں برقرار ہے، رپورٹر فلوروسینٹ گروپ فلوروسینس کا اخراج نہیں کرے گا.اینیلنگ کرتے وقت، پرائمر اور تحقیقات ٹیمپلیٹ سے منسلک ہوتے ہیں۔توسیع کے مرحلے کے دوران، پولیمریز مسلسل نئی زنجیروں کی ترکیب کرتا ہے۔ڈی این اے پولیمریز میں 5′-3′ exonuclease سرگرمی ہوتی ہے۔تحقیقات تک پہنچنے پر، ڈی این اے پولیمریز ٹیمپلیٹ سے تحقیقات کو ہائیڈولائز کرے گا، رپورٹر فلوروسینٹ گروپ کو بجھانے والے فلوروسینٹ گروپ سے الگ کرے گا، اور فلوروسینٹ سگنل جاری کرے گا۔چونکہ جانچ اور ٹیمپلیٹ کے درمیان ون ٹو ون رشتہ ہے، اس لیے جانچ کا طریقہ ٹیسٹ کی درستگی اور حساسیت کے لحاظ سے ڈائی کے طریقہ کار سے برتر ہے۔

تصویر 1 کیو آر ٹی پی سی آر کا اصول

پرائمر ڈیزائن
اصول:

پرائمر کو نیوکلک ایسڈ سیریز کے محفوظ علاقے میں ڈیزائن کیا جانا چاہئے اور ان کی مخصوصیت ہونی چاہئے۔

سی ڈی این اے کی ترتیب استعمال کرنا بہتر ہے، اور ایم آر این اے کی ترتیب بھی قابل قبول ہے۔اگر نہیں، تو ڈی این اے کی ترتیب کا سی ڈی ایس ریجن ڈیزائن معلوم کریں۔
فلوروسینٹ مقداری پراڈکٹ کی لمبائی 80-150bp ہے، سب سے لمبی 300bp ہے، پرائمر کی لمبائی عام طور پر 17-25 بیسز کے درمیان ہوتی ہے، اور اپ اسٹریم اور ڈاؤن اسٹریم پرائمر کے درمیان فرق زیادہ نہیں ہونا چاہیے۔

G+C مواد 40% اور 60% کے درمیان ہے، اور 45-55% بہترین ہے۔
TM قدر 58-62 ڈگری کے درمیان ہے۔
پرائمر ڈائمرز اور سیلف ڈائمرز سے بچنے کی کوشش کریں، (مسلسل تکمیلی اڈوں کے 4 جوڑوں سے زیادہ ظاہر نہ ہوں) ہیئر پین کا ڈھانچہ، اگر ناگزیر ہو تو ΔG<4.5kJ/mol* بنائیں اگر آپ یہ یقینی نہیں بنا سکتے کہ gDNA کو ریورس ٹرانسکرپشن کلین کے دوران ہٹا دیا گیا ہے، تو بہتر ہے کہ انٹرن کے پرائمرز کو ڈیزائن کریں، GAT موڈ سے بچنے کے لیے GAT ′ سے گریز نہیں کیا جا سکتا۔ /C، A/G مسلسل ڈھانچہ (2-3) پرائمر اور غیر
مخصوص متضاد طور پر بڑھا ہوا ترتیب کی ہومولوجی ترجیحی طور پر 70٪ سے کم ہے یا اس میں 8 تکمیلی بنیاد ہومولوجی ہے۔
ڈیٹا بیس:
مطلوبہ الفاظ کے ذریعہ CottonFGD تلاش کریں۔
پرائمر ڈیزائن:
IDT-qPCR پرائمر ڈیزائن

Fig2 IDT آن لائن پرائمر ڈیزائن ٹول صفحہ

تصویر 3 نتیجہ کا صفحہ ڈسپلے
lncRNA پرائمر کا ڈیزائن:
lncRNA:mRNA جیسے ہی اقدامات۔
miRNA:اسٹیم لوپ کے طریقہ کار کا اصول: چونکہ تمام ایم آر این اے تقریباً 23 این ٹی کے مختصر سلسلے ہیں، اس لیے براہ راست پی سی آر کا پتہ نہیں لگایا جا سکتا، اس لیے اسٹیم لوپ سیکوینس ٹول استعمال کیا جاتا ہے۔اسٹیم لوپ کی ترتیب تقریباً 50 این ٹی کا ایک واحد پھنسے ہوئے ڈی این اے ہے، جو خود ہی بال پین کا ڈھانچہ بنا سکتا ہے۔3 'اختتام کو miRNA جزوی ٹکڑے کے تکمیلی سلسلے کے طور پر ڈیزائن کیا جا سکتا ہے، پھر ہدف miRNA کو ریورس ٹرانسکرپشن کے دوران سٹیم لوپ کی ترتیب سے منسلک کیا جا سکتا ہے، اور کل لمبائی 70bp تک پہنچ سکتی ہے، جو qPCR کی طرف سے متعین ایمپلیفائیڈ پروڈکٹ کی لمبائی کے مطابق ہے۔ٹیلنگ miRNA پرائمر ڈیزائن۔
امپلیفیکیشن مخصوص پتہ لگانا:
آن لائن بلاسٹ ڈیٹا بیس: کاٹن ایف جی ڈی بلاسٹ بذریعہ ترتیب مماثلت
لوکل بلاسٹ: لوکل بلاسٹ کرنے کے لیے Blast+ کا استعمال کریں، linux اور macos براہ راست مقامی ڈیٹا بیس قائم کر سکتے ہیں، win10 سسٹم اوبنٹو باش انسٹال کرنے کے بعد بھی کیا جا سکتا ہے۔مقامی دھماکے کا ڈیٹا بیس اور مقامی دھماکے بنائیں؛win10 پر اوبنٹو باش کھولیں۔
نوٹس: اوپری زمینی کپاس اور سمندری جزیرے کی کپاس ٹیٹراپلوڈ فصلیں ہیں، اس لیے دھماکے کا نتیجہ اکثر دو یا زیادہ میچوں کا ہوگا۔ماضی میں، NAU cds کو ڈیٹا بیس کے طور پر استعمال کرتے ہوئے دھماکے کرنے سے صرف چند SNP فرقوں کے ساتھ دو ہم جنس جینز ملنے کا امکان ہے۔عام طور پر، دو ہم جنس جینز کو پرائمر ڈیزائن کے ذریعے الگ نہیں کیا جا سکتا، اس لیے ان کو ایک جیسا ہی سمجھا جاتا ہے۔اگر کوئی واضح انڈیل ہے تو، پرائمر عام طور پر انڈیل پر ڈیزائن کیا جاتا ہے، لیکن یہ پرائمر کی ثانوی ساخت کا باعث بن سکتا ہے مفت توانائی زیادہ ہو جاتی ہے، جس کی وجہ سے ایمپلیفیکیشن کی کارکردگی میں کمی واقع ہوتی ہے، لیکن یہ ناگزیر ہے۔

پرائمر سیکنڈری ڈھانچے کا پتہ لگانا:
مراحل:اوپن اولیگو 7 → ان پٹ ٹیمپلیٹ کی ترتیب → سب ونڈو بند کریں → محفوظ کریں → ٹیمپلیٹ پر پرائمر کا پتہ لگائیں، پرائمر کی لمبائی سیٹ کرنے کے لیے ctrl+D دبائیں → مختلف ثانوی ڈھانچوں کا تجزیہ کریں، جیسے سیلف ڈائمرائزیشن باڈی، ہیٹروڈائمر، ہیئر پین، مماثلت وغیرہ۔ فگر 4 کی آخری دو تصویریں نتائج کی پرائمر ہیں۔سامنے والے پرائمر کا نتیجہ اچھا ہے، کوئی واضح ڈائمر اور ہیئر پین کا ڈھانچہ نہیں ہے، کوئی مسلسل تکمیلی بنیاد نہیں ہے، اور مفت توانائی کی مطلق قدر 4.5 سے کم ہے، جب کہ پیچھے والا پرائمر مسلسل دکھاتا ہے 6 بنیادیں تکمیلی ہیں، اور مفت توانائی 8.8 ہے؛اس کے علاوہ، 3′ کے آخر میں ایک زیادہ سنگین ڈائمر ظاہر ہوتا ہے، اور 4 لگاتار اڈوں کا ایک ڈائمر ظاہر ہوتا ہے۔اگرچہ مفت توانائی زیادہ نہیں ہے، لیکن 3′ dimer Chl ایمپلیفیکیشن کی خصوصیت اور ایمپلیفیکیشن کی کارکردگی کو سنجیدگی سے متاثر کر سکتا ہے۔اس کے علاوہ، بالوں کے پنوں، ہیٹروڈیمرز اور بے میلوں کی جانچ کرنا ضروری ہے۔

تصویر 3 oligo7 کا پتہ لگانے کے نتائج
ایمپلیفیکیشن کی کارکردگی کا پتہ لگانا:
پی سی آر ردعمل کی افادیت کی کارکردگی پی سی آر کے نتائج کو سنجیدگی سے متاثر کرتی ہے۔qRT-PCR میں بھی، مقداری نتائج کے لیے امپلیفیکیشن کی کارکردگی خاص طور پر اہم ہے۔ردعمل بفر میں دیگر مادہ، مشینیں اور پروٹوکول کو ہٹا دیں.پرائمر کے معیار کا بھی qRT-PCR کی افادیت کی کارکردگی پر بہت زیادہ اثر پڑتا ہے۔نتائج کی درستگی کو یقینی بنانے کے لیے، متعلقہ فلوروسینس کوانٹیفیکیشن اور مطلق فلوروسینس کوانٹیفیکیشن دونوں کو پرائمر کی ایمپلیفیکیشن کارکردگی کا پتہ لگانے کی ضرورت ہے۔یہ تسلیم کیا گیا ہے کہ موثر QRT-PCR ایمپلیفیکیشن کی کارکردگی 85% اور 115% کے درمیان ہے۔دو طریقے ہیں:
1. معیاری منحنی طریقہ:
aسی ڈی این اے کو مکس کریں۔
بتدریجی کمزوری۔
c.qPCR
dامپلیفیکیشن کی کارکردگی کا حساب لگانے کے لیے لکیری ریگریشن مساوات
2. LinRegPCR
LinRegPCR حقیقی وقت کے RT-PCR ڈیٹا کے تجزیہ کے لیے ایک پروگرام ہے، جسے SYBR گرین یا اسی طرح کی کیمسٹری پر مبنی مقداری PCR (qPCR) ڈیٹا بھی کہا جاتا ہے۔یہ پروگرام نان بیس لائن درست کردہ ڈیٹا کا استعمال کرتا ہے، ہر نمونے پر الگ الگ بیس لائن تصحیح کرتا ہے، ونڈو آف لائنریٹی کا تعین کرتا ہے اور پھر PCR ڈیٹا سیٹ کے ذریعے سیدھی لائن میں فٹ ہونے کے لیے لکیری ریگریشن تجزیہ کا استعمال کرتا ہے۔اس لائن کی ڈھلوان سے ہر انفرادی نمونے کی پی سی آر کی کارکردگی کا حساب لگایا جاتا ہے۔اوسط PCR کارکردگی فی ایمپلیکن اور Ct قدر فی نمونہ ایک ابتدائی ارتکاز کا حساب لگانے کے لیے استعمال کیا جاتا ہے، جس کا اظہار صوابدیدی فلوروسینس یونٹس میں ہوتا ہے۔ڈیٹا ان پٹ اور آؤٹ پٹ ایکسل اسپریڈشیٹ کے ذریعے ہوتے ہیں۔صرف نمونہ
اختلاط کی ضرورت ہے، کوئی تدریجی نہیں۔
اقدامات کی ضرورت ہے:(ایک مثال کے طور پر بولے CFX96 کو لیں، واضح ABI والی مشین نہیں ہے)
تجربہ:یہ ایک معیاری qPCR تجربہ ہے۔
qPCR ڈیٹا آؤٹ پٹ:LinRegPCR آؤٹ پٹ فائلوں کی دو شکلوں کو پہچان سکتا ہے: RDML یا quantification Amplification نتیجہ۔درحقیقت، یہ مشین کے ذریعے سائیکل نمبر اور فلوروسینس سگنل کی اصل وقت کا پتہ لگانے کی قیمت ہے، اور امپلیفیکیشن لکیری حصے کی کارکردگی کی فلوروسینس تبدیلی کی قدر کا تجزیہ کرکے حاصل کی جاتی ہے۔
ڈیٹا کا انتخاب: نظریہ میں، RDML قدر قابل استعمال ہونی چاہیے۔اندازہ ہے کہ میرے کمپیوٹر کا مسئلہ یہ ہے کہ سافٹ ویئر آر ڈی ایم ایل کو نہیں پہچان سکتا، اس لیے میرے پاس ایکسل آؤٹ پٹ ویلیو اصل ڈیٹا کے طور پر ہے۔یہ سفارش کی جاتی ہے کہ پہلے اعداد و شمار کی کسی نہ کسی طرح کی جانچ پڑتال کریں، جیسے نمونے شامل کرنے میں ناکامی وغیرہ۔ آؤٹ پٹ ڈیٹا میں پوائنٹس کو حذف کیا جا سکتا ہے (یقیناً، آپ انہیں حذف نہیں کر سکتے، LinRegPCR بعد کے مرحلے میں ان نکات کو نظر انداز کر دے گا)

تصویر 5 کیو پی سی آر ڈیٹا ایکسپورٹ

تصویر 6 امیدواروں کے نمونوں کا انتخاب

ڈیٹا ان پٹ:کوالیفیکیشن ایمپلیفیکیشن نتائج.xls کھولیں، → LinRegPCR کھولیں → فائل → ایکسل سے پڑھیں → پیرامیٹر منتخب کریں جیسا کہ شکل 7 میں دکھایا گیا ہے → ٹھیک ہے → بیس لائنز کا تعین کریں پر کلک کریں

linRegPCR ڈیٹا ان پٹ کے Fig7 مراحل

نتیجہ:اگر کوئی تکرار نہیں ہے تو، کسی گروپ کی ضرورت نہیں ہے.اگر تکرار ہو تو، نمونے کی گروپ بندی میں گروپ بندی میں ترمیم کی جا سکتی ہے، اور جین کا نام شناخت کنندہ میں درج کیا جاتا ہے، اور پھر وہی جین خود بخود گروپ ہو جائے گا۔آخر میں، فائل پر کلک کریں، ایکسل برآمد کریں، اور نتائج دیکھیں۔ہر کنویں کے پروردن کی کارکردگی اور R2 کے نتائج دکھائے جائیں گے۔دوم، اگر آپ گروپوں میں تقسیم کرتے ہیں، تو درست اوسط ایمپلیفیکیشن کی کارکردگی ظاہر ہوگی۔یقینی بنائیں کہ ہر پرائمر کی ایمپلیفیکیشن کارکردگی 85% اور 115% کے درمیان ہے۔اگر یہ بہت بڑا یا بہت چھوٹا ہے، تو اس کا مطلب ہے کہ پرائمر کی ایمپلیفیکیشن کی کارکردگی ناقص ہے۔

تصویر 8 نتیجہ اور ڈیٹا آؤٹ پٹ

تجرباتی عمل:
آر این اے کے معیار کی ضروریات:
طہارت:1.72.0 اشارہ کرتا ہے کہ بقایا آئسوتھیوسائنیٹ ہو سکتا ہے۔کلین نیوکلک ایسڈ A260/A230 تقریباً 2 ہونا چاہئے .اگر 230 nm پر مضبوط جذب ہو تو یہ ظاہر کرتا ہے کہ نامیاتی مرکبات ہیں جیسے فینیٹ آئنز۔اس کے علاوہ، یہ 1.5٪ ایگروز جیل الیکٹروفورسس کے ذریعہ پتہ چلا جاسکتا ہے۔مارکر کی طرف اشارہ کریں، کیونکہ ssRNA میں کوئی ڈینیچریشن نہیں ہے اور مالیکیولر ویٹ لوگارتھم کا کوئی لکیری تعلق نہیں ہے، اور مالیکیولر وزن کو درست طریقے سے ظاہر نہیں کیا جا سکتا۔ارتکاز: نظریاتی طور پرنہیں100ng/ul سے کم، اگر ارتکاز بہت کم ہے، تو طہارت عام طور پر کم ہے لمبا نہیں

تصویر 9 آر این اے جیل

اس کے علاوہ، اگر نمونہ قیمتی ہے اور آر این اے کا ارتکاز زیادہ ہے، تو اسے نکالنے کے بعد الگ کرنے کی سفارش کی جاتی ہے، اور الٹ ٹرانسکرپشن کے لیے RNA کو 100-300ng/ul کے حتمی ارتکاز تک پتلا کر دیں۔میںریورس ٹرانسکرپشن کا عمل، جب mRNA کو نقل کیا جاتا ہے تو، oligo (dt) پرائمر جو خاص طور پر polyA ٹیل سے منسلک ہو سکتے ہیں ریورس ٹرانسکرپشن کے لیے استعمال کیے جاتے ہیں، جب کہ lncRNA اور circRNA کل RNA کے ریورس ٹرانسکرپشن کے لیے رینڈم ہیکسامر (Random 6 mer) پرائمر استعمال کرتے ہیں miRNA کے لیے، miRNA-مخصوص پرائمر استعمال کیے جاتے ہیں۔بہت سی کمپنیوں نے اب خصوصی ٹیلنگ کٹس لانچ کی ہیں۔اسٹیم لوپ کے طریقہ کار کے لیے، ٹیلنگ کا طریقہ زیادہ آسان، ہائی تھرو پٹ، اور ریجنٹ سیونگ ہے، لیکن ایک ہی خاندان کے ایم آر این اے کو الگ کرنے کا اثر اسٹیم لوپ کے طریقے جتنا اچھا نہیں ہونا چاہیے۔ہر ریورس ٹرانسکرپشن کٹ میں جین کے مخصوص پرائمر (سٹیم لوپس) کے ارتکاز کے تقاضے ہوتے ہیں۔miRNA کے لیے استعمال ہونے والا اندرونی حوالہ U6 ہے۔اسٹیم لوپ الٹنے کے عمل میں، U6 کی ایک ٹیوب کو الگ سے الٹ دیا جانا چاہیے، اور U6 کے اگلے اور پچھلے پرائمر کو براہ راست جوڑا جانا چاہیے۔circRNA اور lncRNA دونوں HKGs کو اندرونی حوالہ کے طور پر استعمال کر سکتے ہیں۔میںسی ڈی این اے کا پتہ لگانا،
اگر آر این اے میں کوئی مسئلہ نہیں ہے تو سی ڈی این اے بھی ٹھیک ہونا چاہیے۔تاہم، اگر تجربے کے کمال کا تعاقب کیا جائے، تو بہتر ہے کہ اندرونی حوالہ جین (ریفرنس جین، آر جی) استعمال کیا جائے جو جی ڈی این اے کو سی ڈی ایس سے ممتاز کر سکے۔عام طور پر، آر جی ایک ہاؤس کیپنگ جین ہے۔, HKG) جیسا کہ شکل 10 میں دکھایا گیا ہے۔اس وقت، میں سویا بین سٹوریج پروٹین بنا رہا تھا، اور اندرونی حوالہ کے طور پر انٹرن پر مشتمل ایکٹین 7 استعمال کرتا تھا۔gDNA میں اس پرائمر کے ایمپلیفائیڈ ٹکڑے کا سائز 452bp تھا، اور اگر cDNA کو ٹیمپلیٹ کے طور پر استعمال کیا جاتا تو یہ 142bp تھا۔پھر ٹیسٹ کے نتائج سے پتہ چلا کہ cDNA کا حصہ دراصل gDNA سے آلودہ تھا، اور یہ بھی ثابت ہوا کہ ریورس ٹرانسکرپشن کے نتیجے میں کوئی مسئلہ نہیں تھا، اور اسے PCR کے سانچے کے طور پر استعمال کیا جا سکتا ہے۔ایگروز جیل الیکٹروفورسس کو براہ راست سی ڈی این اے کے ساتھ چلانا بیکار ہے، اور یہ ایک پھیلا ہوا بینڈ ہے، جو قائل نہیں ہے۔

تصویر 10 سی ڈی این اے کا پتہ لگانا

کیو پی سی آر کی شرائط کا تعینعام طور پر کٹ کے پروٹوکول کے مطابق کوئی مسئلہ نہیں ہے، بنیادی طور پر ٹی ایم ویلیو کے مرحلے میں۔اگر پرائمر ڈیزائن کے دوران کچھ پرائمر اچھی طرح سے ڈیزائن نہیں کیے گئے ہیں، جس کے نتیجے میں tm قدر اور نظریاتی 60°C کے درمیان بڑا فرق ہوتا ہے، تو یہ تجویز کی جاتی ہے کہ cDNA نمونے ملانے کے بعد، پرائمر کے ساتھ گریڈینٹ PCR چلائیں، اور بینڈ کے بغیر درجہ حرارت کو ٹی ایم ویلیو کے طور پر سیٹ کرنے سے گریز کرنے کی کوشش کریں۔

ڈیٹا کا تجزیہ

روایتی رشتہ دار فلوروسینس مقداری پی سی آر پروسیسنگ طریقہ بنیادی طور پر 2 کے مطابق ہے۔-ΔΔCT.ڈیٹا پروسیسنگ ٹیمپلیٹ۔

متعلقہ مصنوعات:

ریئل ٹائم پی سی آر آسان^TM -تقمان

ریئل ٹائم پی سی آر آسان^TM -سائبر گرین آئی

RT Easy I (پہلے اسٹرینڈ سی ڈی این اے کی ترکیب کے لیے ماسٹر پریمکس)

RT Easy II (QPCR کے لیے پہلے اسٹرینڈ cDNA ترکیب کے لیے ماسٹر پریمکس)