پی سی آر, متعدد پی سی آر, حالت پی سی آر میں, پی سی آر کو ریورس کریں۔, RT-PCR, کیو پی سی آر (1)-پی سی آر

ہم مختلف PCR کے تصورات، اقدامات اور تفصیلات کو ترتیب دیں گے۔

Ⅰ. پی سی آر

پولیمریز چین ری ایکشن، جسے PCR کہا جاتا ہے، ایک سالماتی حیاتیاتی ٹیکنالوجی ہے جو مخصوص DNA کے ٹکڑوں کو بڑا کرنے کے لیے استعمال ہوتی ہے۔اسے وٹرو میں ایک خاص ڈی این اے کی نقل کے طور پر شمار کیا جا سکتا ہے۔DNA پولیمریز (DNA Polymerase I) کو 1955 کے اوائل میں دریافت کیا گیا تھا، اور E. Coli کا کلینو فریگمنٹ، جس کی تجرباتی قدر اور عملیت ہے، ڈاکٹر ایچ کلینو نے 1970 کی دہائی کے اوائل میں دریافت کی تھی، لیکن چونکہ یہ انزائم درجہ حرارت کو برداشت نہیں کرتا، اس لیے اعلی درجہ حرارت اس کو ڈیجنریٹ کر سکتا ہے، اس لیے یہ پولیمریج کے ہائی ری ایکشن کے ساتھ مل نہیں سکتا۔آج استعمال ہونے والے انزائمز (جسے Taq پولیمریز کہا جاتا ہے) کو 1976 میں تھرمس ​​ایکواٹیکس سے الگ تھلگ کر دیا گیا تھا، جو ایک گرم چشمہ کے جراثیم ہے۔ اس کی خصوصیت یہ ہے کہ یہ اعلی درجہ حرارت کے خلاف مزاحمت کر سکتا ہے اور ایک مثالی انزائم ہے، لیکن یہ 1980 کی دہائی کے بعد بڑے پیمانے پر استعمال ہوتا ہے۔PCR کے اصل قدیم پروٹو ٹائپ کا اصل تصور جین کی مرمت اور نقل کرنے سے ملتا جلتا ہے، جسے ڈاکٹر KJell Kleppe نے 1971 میں تجویز کیا تھا۔ اس نے پہلی سادہ اور قلیل مدتی جین کاپی شائع کی (PCR کے پہلے دو سائیکل ری ایکشن کی طرح)۔آج جو پی سی آر تیار کیا گیا ہے اسے ڈاکٹر کیری بی ملس نے 1983 میں تیار کیا تھا۔ ڈاکٹر ملس نے اس سال پی ای کمپنیوں کی خدمت کی، اس لیے پی سی آر انڈسٹری میں پی ای کو ایک خاص حیثیت حاصل ہے۔ڈاکٹر ملیس نے باضابطہ طور پر پہلا متعلقہ مقالہ سائیکی اور دیگر کے ساتھ 1985 میں شائع کیا۔ اس کے بعد سے، پی سی آر کا استعمال روزانہ ہزاروں میل ہے، اور متعلقہ مقالوں کا معیار بہت سے دوسرے تحقیقی طریقوں کو ناگوار بنانے کے لیے کہا جا سکتا ہے۔اس کے بعد، پی سی آر ٹیکنالوجی بڑے پیمانے پر حیاتیاتی سائنسی تحقیق اور کلینیکل ایپلی کیشنز میں استعمال ہوتی ہے، جو سالماتی حیاتیات کی تحقیق کی سب سے اہم ٹیکنالوجی بنتی ہے۔ملیس نے کیمسٹری میں 1993 کا نوبل انعام بھی جیتا تھا۔

پی سی آراصول

پی سی آر ٹکنالوجی کا بنیادی اصول ڈی این اے کے قدرتی نقل کے عمل سے ملتا جلتا ہے، اور اس کی مخصوصیت اولیگونیوکلیوٹائڈ پرائمر پر منحصر ہے جو ہدف کی ترتیب کے دونوں سروں کے لیے تکمیلی ہے۔پی سی آر تنزلی-اینیلنگ-توسیع کرنے والے تین بنیادی رد عمل کے مراحل پر مشتمل ہے: ① ٹیمپلیٹ ڈی این اے کا انحطاط: ٹیمپلیٹ ڈی این اے کو ایک خاص مدت کے لیے تقریباً 93 ° C پر گرم کرنے کے بعد، پی سی آر ایمپلیفیکیشن کے ذریعے تشکیل پانے والے ڈوئل چین ڈی این اے کے لیے ڈوئل ڈی این اے سلوشن اس ٹیمپلیٹ کے ساتھ ایک پرائمری ڈی این اے کے لیے تیار کیا جا سکتا ہے۔ اگلے دور کا ردعمل② ٹیمپلیٹ DNA اور پرائمر کی اینیلنگ (کمپاؤنڈ): ٹیمپلیٹ DNA کے گرم ہونے اور ایک زنجیر میں انحطاط کے بعد، درجہ حرارت تقریباً 55 °C تک گر جاتا ہے۔پرائمر اور ٹیمپلیٹ DNA سنگل چین کی تکمیلی ترتیب۔③پرائمر کی توسیع: ڈی این اے ٹیمپلیٹ - پرائمر بائنڈنگ TaqDNA پولیمریز کے عمل پر مبنی ہے، جس میں رد عمل کے خام مال کے طور پر dNTP ہے۔نقل کے اصول کو برقرار رکھیں، ایک نئی نیم محفوظ کاپی چین کی ترکیب کریں جو ٹیمپلیٹ DNA چین کی تکمیل کرے، اور دوبارہ سائیکل ڈیجنریشن-اینیلنگ-ایکسٹینشن تین عمل مزید "سیمی ریزرو کاپی چین" حاصل کر سکتے ہیں، اور یہ نیا سلسلہ دوبارہ دستیاب ہے اگلے سائیکل کے لیے ایک ٹیمپلیٹ بن جائے۔لوپ کو مکمل کرنے میں 2-4 منٹ لگتے ہیں، ہدف جین کو 2-3 گھنٹے میں کئی ملین بار بڑھایا جا سکتا ہے۔

معیاریپی سی آرری ایکشن سسٹم

پی سی آر رد عمل کے پانچ عناصر

پی سی آر کے رد عمل میں بنیادی طور پر پانچ قسم کے مادے شامل ہوتے ہیں، یعنی پرائمر، انزائم، ڈی این ٹی پی، ٹیمپلیٹ اور بفر (Mg2+ درکار ہے)۔[پی سی آر طریقہ کار]

معیاری پی سی آر عمل کو تین مراحل میں تقسیم کیا گیا ہے۔

1. DNA انحطاط (90°C-96°C): تھرمل ایکشن کے تحت ڈوئل چین ڈی این اے ٹیمپلیٹس، ہائیڈروجن بانڈ ٹوٹ جاتے ہیں، جس سے سنگل چین ڈی این اے بنتا ہے۔

2. اینیلنگ (25℃ -65℃): سسٹم کا درجہ حرارت کم ہو جاتا ہے، پرائمر کو DNA ٹیمپلیٹ کے ساتھ جوڑ کر ایک مقامی ڈوئل چین بنایا جاتا ہے۔

3. ایکسٹینشن (70℃ -75℃): Taq انزائم (تقریباً 72°C، بہترین سرگرمی) کے عمل کے تحت، dNTP کو خام مال کے طور پر استعمال کیا جاتا ہے، پرائمر کے 5′ سرے → 3′ سرے تک پھیلا ہوا ہے، ترکیب اور ٹیمپلیٹ ایک دوسرے کے DNA چین کو مکمل کرتے ہیں۔

ہر سائیکل کو ڈینیچر، اینیلڈ اور بڑھایا جاتا ہے، جس سے ڈی این اے کے مواد کو دگنا کیا جاتا ہے۔فی الحال، مختصر ایمپلیفیکیشن ایریا کی وجہ سے، کچھ پی سی آر کو بہت کم وقت میں نقل کیا جا سکتا ہے یہاں تک کہ اگر Taq انزائم کی سرگرمی بہترین نہ ہو، تو اسے دو مراحل میں تبدیل کیا جا سکتا ہے، یعنی اینیلنگ اور ایکسٹینشن ایک ہی وقت میں 60°C-65°C پر کیا جا سکتا ہے۔لفٹنگ اور کولنگ کے عمل کو کم کرنے اور ردعمل کی رفتار کو بہتر بنانے کے لیے۔

پی سی آر رد عمل کی خصوصیات

● اعلیٰ خصوصیت

PCR ردعمل کے مخصوص فیصلہ کن عوامل ہیں: ① پرائمر اور ٹیمپلیٹ DNA کا مخصوص امتزاج۔②بیس پیئرنگ کا اصول۔③ TaqDNA پولیمریز ترکیب رد عمل کی وفاداری۔④ ہدف جین کی مخصوصیت اور قدامت پسندی۔

پرائمر اور ٹیمپلیٹس کا صحیح امتزاج کلید ہے۔پرائمر اور ٹیمپلیٹ کی بائنڈنگ اور پرائمر چین کی توسیع الکلائن بیس میچنگ کے اصول پر مبنی ہے۔پولیمریز کی ترکیب کے رد عمل کی وفاداری اور رد عمل میں ٹیمپلیٹ اور پرائمر کو بائنڈنگ (کمپاؤنڈ) بنانے کے لیے Taq DNA پولیمریز کی اعلی درجہ حرارت کی مزاحمت کو زیادہ درجہ حرارت پر انجام دیا جا سکتا ہے۔مجموعہ کی خصوصیت بہت بڑھ گئی ہے.کلپ اعلی درجے کی درستگی کو برقرار رکھ سکتا ہے۔اعلی قدامت پسندی اور اعلی قدامت پسندی کے ساتھ ایک ہدف جینیاتی خطہ منتخب کرنے سے، اس کی مخصوصیت زیادہ ہوتی ہے۔

● اعلیٰ حساسیت

پی سی آر مصنوعات کی پیداوار کا حجم انڈیکس کے حساب سے بڑھایا جاتا ہے، جو مائیکرو کنٹرولر کی سطح کو مائیکرو گرام (μg=-6) کی سطح تک بڑھانے کے لیے Picker (PG=10-12) کے ابتدائی سانچے کو بڑھا سکتا ہے۔1 ملین خلیات سے ایک ہدف خلیات کا پتہ لگایا جا سکتا ہے؛وائرس کا پتہ لگانے میں، PCR کی حساسیت 3 RFUs تک پہنچ سکتی ہے (خالی جگہوں سے بنے یونٹ)؛بیکٹیریل سائنس میں کم از کم پتہ لگانے کی شرح 3 بیکٹیریا ہے۔

● سادہ اور تیز

پی سی آر کی عکاسی ایک اعلی درجہ حرارت Taq DNA پولیمریز کا استعمال کرتی ہے، جو ایک وقت میں رد عمل کا حل جوڑتا ہے، یعنی DNA ایمپلیفیکیشن سلوشن اور پانی کے غسل کے برتن پر ایک انحطاط-اینیل-توسیع ردعمل۔عام طور پر ایمپلیفیکیشن ری ایکشن 2 سے 4 گھنٹے میں مکمل ہو جاتا ہے۔بڑھی ہوئی مصنوعات کا عام طور پر برقی تلوار کے ذریعے تجزیہ کیا جاتا ہے، اور اس کے لیے آاسوٹوپس، کوئی تابکار آلودگی، اور آسانی سے فروغ دینے کی ضرورت نہیں ہوتی ہے۔

● نمونے کی پاکیزگی کم ہے۔

وائرس یا بیکٹیریا اور کلچر سیلز کو الگ کرنے کی ضرورت نہیں ہے۔ڈی این اے خام مصنوعات اور آر این اے کو یمپلیفائر کے طور پر استعمال کیا جا سکتا ہے۔ڈی این اے ایمپلیفیکیشن کا پتہ لگانے کو براہ راست طبی نمونوں کا استعمال کرتے ہوئے استعمال کیا جا سکتا ہے جیسے کہ خون، جسم کے مائع، کھانسی کو دھونے والا سیال، بال، خلیات اور زندہ بافتیں۔

پی سی آرعام مسائل

● غلط منفی، کوئی ایمپلیفائیڈ بینڈ نہیں۔

PCR ردعمل کے اہم مراحل میں شامل ہیں: ① ٹیمپلیٹ نیوکلک ایسڈ کی تیاری، ② معیار اور پرائمر کی خصوصیت، ③ خامروں کا معیار ④ PCR سائیکل کے حالات۔وجہ تلاش کرنے کے لیے مندرجہ بالا لنکس کا تجزیہ اور مطالعہ بھی کرنا چاہیے۔

ٹیمپلیٹس: ① ٹیمپلیٹ میں متفرق پروٹین ہوتا ہے، ② ٹیمپلیٹ میں Taq انزائم روکنے والا ہوتا ہے، ③ ٹیمپلیٹ میں موجود پروٹین کو ختم نہیں کیا جاتا، خاص طور پر کروموسوم میں گروپ پروٹین۔⑤ ڈیمینر نیوکلک ایسڈ کا انحطاط مکمل نہیں ہے۔جب انزائمز اور پرائمر کا معیار اچھا ہوتا ہے، تو کوئی ایمپلیفیکیشن بینڈ نہیں ہوتا، جو کہ نمونوں کے ہاضمہ علاج کا زیادہ امکان ہوتا ہے۔ٹیمپلیٹ نیوکلک ایسڈ نکالنے کے عمل میں کچھ گڑبڑ ہے، لہٰذا مؤثر اور مستحکم ہاضمہ حل تیار کرنے کے لیے، اس کا طریقہ کار طے کیا جانا چاہیے اور من مانی تبدیلی نہیں کی جانی چاہیے۔

انزائم کا غیر فعال ہونا: ایک نیا انزائم یا پرانے اور نئے دونوں انزائمز کو ایک ساتھ استعمال کیا جانا چاہیے تاکہ یہ تجزیہ کیا جا سکے کہ آیا انزائم کی سرگرمی ختم ہو گئی ہے یا ناکافی ہے، جس کی وجہ سے غلط منفی اثرات مرتب ہوتے ہیں۔واضح رہے کہ Taq enzyme یا ethidium bromide بعض اوقات بھول جاتے ہیں۔

پرائمر: پرائمر کا معیار، پرائمر کا ارتکاز، اور آیا دونوں پرائمر کا ارتکاز سڈول ہے۔یہ پی سی آر کی ناکامی کی ایک عام وجہ ہے یا بڑھتا ہوا بینڈ مثالی نہیں ہے اور پھیلنے کا خطرہ ہے۔کچھ بیچ نمبروں کے پرائمر کے معیار کے ساتھ مسائل ہیں۔دونوں پرائمر میں زیادہ ارتکاز اور کم ارتکاز ہوتا ہے، جس کی وجہ سے کم کارکردگی غیر متناسب امپلیفیکیشن ہوتی ہے۔انسدادی اقدامات یہ ہیں: ① اکائیوں کی ترکیب کے لیے ایک اچھا پرائمر منتخب کریں۔② پرائمر کا ارتکاز نہ صرف OD قدر پر منحصر ہے بلکہ اگر شوگر جیل الیکٹروفورسس بنانے کے لیے پرائمر کے اصل مائع پر بھی توجہ دیتا ہے۔ایک پرائمر سٹرپ زون ہونا چاہیے، اور دونوں پرائمر کی چمک عام طور پر یکساں ہونی چاہیے۔بیلٹ، پی سی آر اس وقت ناکام ہو سکتا ہے، اور اسے پرائمر سنتھیسس یونٹ کے ساتھ حل کیا جانا چاہیے۔اگر ایک پرائمر زیادہ ہے، تو چمک کم ہے، اور پتلا ہونے پر اس کا ارتکاز متوازن ہونا چاہیے۔③ ریفریجریٹر کے ایک سے زیادہ جمنے یا طویل مدتی ریفریجریشن حصوں کو روکنے کے لیے پرائمر کی ادائیگی اور اسے زیادہ ارتکاز میں ذخیرہ کیا جانا چاہیے، جس سے پرائمر خراب اور خراب ہو جائے گا۔④ پرائمر کا ڈیزائن غیر معقول ہے، جیسے پرائمر کی لمبائی ناکافی ہے، اور پرائمر کے درمیان ڈی کلسٹر بنتا ہے۔

Mg2+concentration: Mg2+ion concentration PCR ایمپلیفیکیشن کی کارکردگی پر بہت زیادہ اثر ڈالتا ہے۔ضرورت سے زیادہ ارتکاز PCR امپلیفیکیشن کے مخالف جنس کو کم کر سکتا ہے۔اگر ارتکاز بہت کم ہے تو، پی سی آر ایمپلیفیکیشن آؤٹ پٹ یہاں تک کہ توسیعی بینڈ کے بغیر پی سی آر ایمپلیفیکیشن کو ناکام بنا دے گا۔

رد عمل کے حجم کی تبدیلی: پی سی آر ایمپلیفیکیشن میں استعمال ہونے والا حجم 20ul، 30ul، اور 50ul یا 100uL ہے، PCR ایمپلیفیکیشن کے لیے درخواست کا بڑا حجم سائنسی تحقیق اور طبی جانچ کے مختلف مقاصد کے مطابق مقرر کیا گیا ہے۔چھوٹے حجم جیسے 20ul بنانے کے بعد، سائز بناتے وقت ہڈی کی حالت بنانا ضروری ہے، ورنہ یہ ناکام ہوجائے گا.

جسمانی وجوہات: پی سی آر ایمپلیفیکیشن کے لیے تبدیلی بہت اہم ہے۔اگر انحطاط کا درجہ حرارت کم ہے، انحطاط کا وقت کم ہے، یہ غلط منفی میں ہونے کا امکان ہے۔بہت کم اینیلنگ درجہ حرارت غیر مخصوص امپلیفیکیشن کا سبب بن سکتا ہے اور مخصوص ایمپلیفیکیشن کی کارکردگی کو کم کر سکتا ہے۔پی سی آر ایمپلیفیکیشن کی کارکردگی کو کم کرنے کے لیے پرائمر اور ٹیمپلیٹس کے امتزاج کو بہت زیادہ متاثر کرتا ہے۔بعض اوقات ایکسٹینشن یا پانی میں گھلنشیل ککر میں تغیر، اینیلنگ اور توسیع شدہ درجہ حرارت کا پتہ لگانے کے لیے معیاری تھرمامیٹر استعمال کرنا ضروری ہوتا ہے، جو کہ پی سی آر کی ناکامی کی ایک وجہ ہے۔

ہدف کی ترتیب کی مختلف حالتیں: اگر ہدف کی ترتیب واقع ہوتی ہے، تبدیلی یا حذف، پروٹوٹائپ اور ٹیمپلیٹ کا امتزاج یکجا ہو جاتا ہے، یا ہدف کی ترتیب کی کمی کی وجہ سے، پرائمر اور ٹیمپلیٹ تکمیلی ترتیب سے محروم ہو جائیں گے، اور اس کا PCR ایمپلیفیکیشن کامیاب نہیں ہو گا۔

● غلط مثبت

پی سی آر ایمپلیفیکیشن بینڈ ٹارگٹ سیکوینس بینڈ کے ساتھ مطابقت رکھتا ہے، اور بعض اوقات اس کا بینڈ زیادہ صاف اور اونچا ہوتا ہے۔

پرائمر ڈیزائن مناسب نہیں ہے: منتخب ایمپلیفیکیشن سیکوینس اور غیر مقصدی ایمپلیفیکیشن سیکوئنس ہم جنس ہیں، لہذا جب پی سی آر ایمپلیفیکیشن، ایمپلیفائیڈ پی سی آر پروڈکٹس غیر مقصدی ترتیب ہیں۔ہدف کی ترتیب بہت مختصر ہے یا پرائمر بہت چھوٹا ہے، اور یہ غلط مثبت کا شکار ہے۔دوبارہ ڈیزائن کرنے کی ضرورت ہے۔

ہدف کی ترتیب یا امپلیفیکیشن مصنوعات کی کراس آلودگی: اس آلودگی کی دو وجوہات ہیں: پہلی، پورے جینوم یا بڑے حصوں کی کراس آلودگی، جو غلط مثبتات کا باعث بنتی ہے۔اس قسم کے جھوٹے مثبت کو درج ذیل طریقوں سے حل کیا جا سکتا ہے: آپریشن کے دوران محتاط اور نرمی برتیں تاکہ ہدف کی ترتیب کو سیمپل گن میں سانس لینے یا سینٹری فیوگل ٹیوب سے باہر نکلنے سے روکا جا سکے۔انزائمز اور مادوں کے علاوہ جو زیادہ درجہ حرارت کو برداشت نہیں کر سکتے، تمام ری ایجنٹس یا آلات کو ہائی پریشر سے جراثیم سے پاک کیا جانا چاہیے۔سینٹرفیوگل پائپ اور نمونے ایک وقت میں استعمال کیے جائیں۔جب ضروری ہو، نمونوں کو شامل کرنے سے پہلے، ری ایکشن ٹیوب اور ری ایجنٹ کو الٹراوائلٹ شعاعوں کے سامنے لایا جاتا ہے تاکہ موجودہ نیوکلک ایسڈ کو تباہ کیا جا سکے۔دوسرا، فضائی آلودگی میں چھوٹے ٹکڑے۔یہ چھوٹے ٹکڑے ہدف کی ترتیب سے چھوٹے ہیں، لیکن ان میں کچھ مخصوص ہم آہنگی ہے۔اسے ایک دوسرے کے ساتھ جوڑا جا سکتا ہے۔پرائمر کی تکمیل کے بعد، پی سی آر پروڈکٹ کو بڑھایا جا سکتا ہے، جو غلط مثبت پیداوار کا سبب بنے گا۔اسے نیسٹ پی سی آر طریقہ کو کم کرنے یا ختم کرنے کے لیے استعمال کیا جا سکتا ہے۔

● غیر مخصوص ایمپلیفیکیشن بینڈ ظاہر کریں۔

پی سی آر ایمپلیفیکیشن کے بعد ظاہر ہونے والے بینڈ متوقع سائز، یا بڑے یا چھوٹے، یا ایک ہی وقت میں، یا ایک ہی وقت میں، مخصوص ایمپلیفیکیشن بینڈ اور غیر مخصوص ایمپلیفیکیشن بینڈ سے مطابقت نہیں رکھتے۔غیر مخصوص بینڈ کا ظہور یہ ہے: سب سے پہلے، پرائمر ہدف کی ترتیب کے نامکمل تکمیلی ہوتے ہیں، یا ڈی کلسٹر بنانے کے لیے پرائمر کا پولیمرائزیشن۔دوسرا یہ کہ MG2 + آئنوں کا ارتکاز بہت زیادہ ہے، اینیلنگ کا درجہ حرارت بہت کم ہے، اور PCR سائیکلوں کی تعداد متعلقہ ہے۔دوم، خامروں کا معیار اور مقدار۔اکثر، بعض ذرائع کے انزائمز غیر خصوصی بینڈز کا شکار ہوتے ہیں اور دوسرے ماخذ کے انزائمز واقع نہیں ہوتے ہیں۔بعض اوقات خامروں کی غیر مخصوص پرورش بھی ہوتی ہے۔جوابی اقدامات یہ ہیں: اگر ضروری ہو تو پرکشش اشیاء کو دوبارہ ڈیزائن کیا جائے۔انزائم کی مقدار کو کم کریں یا کسی اور ذریعہ کے انزائم کو تبدیل کریں۔پرائمری کی مقدار کو کم کریں، ٹیمپلیٹس کی مقدار کو مناسب طریقے سے بڑھائیں، اور سائیکلوں کی تعداد کو کم کریں۔اینیلنگ کے درجہ حرارت کو مناسب طریقے سے بڑھائیں یا درجہ حرارت کے دو نقطہ طریقہ (93 ° C انحطاط، annealing اور 65 ° C پر توسیع) استعمال کریں۔

● فلیکی ٹو یا سمیر ٹیپ دکھائی دیں۔

پی سی آر ایمپلیفیکیشن بعض اوقات لگائی جاتی ہے یا گولہ باری ہوتی ہے یا قالین جیسی بیلٹ ہوتی ہے۔اس وجہ سے، انزائمز کی ضرورت سے زیادہ مقدار یا انزائم کے ناقص معیار کی وجہ سے، dNTP کا ارتکاز بہت زیادہ ہے، Mg2+ کا ارتکاز بہت زیادہ ہے، اینیلنگ کا درجہ حرارت بہت کم ہے، اور سائیکلوں کی تعداد بہت زیادہ ہے۔جوابی اقدامات یہ ہیں: ① خامروں کی مقدار کو کم کریں، یا کسی اور ذریعہ کے انزائم کو تبدیل کریں۔②dNTP کے ارتکاز کو کم کریں ③Mg2+ ارتکاز کو مناسب طریقے سے کم کریں۔④ ٹیمپلیٹس کی مقدار میں اضافہ کریں اور سائیکلوں کی تعداد کو کم کریں۔

متعلقہ مصنوعات

PCR Heroᵀᴹ (ڈائی کے ساتھ)

◮ اعلی وفاداری: عام Taq انزائم سے 6 گنا؛

◮ تیز تر ایمپلیفیکیشن کی رفتار

◮ مزید ٹیمپلیٹ موافقت

◮ اعلی پرورش کی کارکردگی

◮ ماحولیاتی رواداری زیادہ مضبوط ہے: ایک ہفتے کے لیے 37°C پر رکھا جائے، 90% سے زیادہ سرگرمی کو برقرار رکھا جائے؛

◮ اس میں 5'→3' DNA پولیمریز سرگرمی اور 5'→3' exonuclease سرگرمی ہے، بغیر 3'→5' exonuclease سرگرمی۔

PCR Easyᴹ (ڈائی کے ساتھ)

منفرد رد عمل کا نظام اور اعلی کارکردگی Taq DNA Polymerase پی سی آر کے رد عمل کو اعلی وسعت کی کارکردگی، مخصوصیت اور حساسیت کا حامل بناتا ہے۔

RT-qPCR Easyᵀᴹ (One Step)-SYBR گرین I

◮ ایک قدمی کٹ ریورس ٹرانسکرپشن اور qPCR کو ایک ہی ٹیوب میں دو رد عمل بناتی ہے، صرف ٹیمپلیٹ RNA، مخصوص PCR پرائمر اور RNase-Free ddH شامل کرنے کی ضرورت ہے۔₂O.

◮ کٹ تیزی سے اور مؤثر طریقے سے وائرل RNA کا تجزیہ کر سکتی ہے یا RNA کا پتہ لگا سکتی ہے۔

◮ کٹ ایک منفرد Foregene ریورس ٹرانسکرپشن ری ایجنٹ اور Foregene HotStar Taq DNA Polymerase کا استعمال کرتی ہے جو ایک منفرد رد عمل کے نظام کے ساتھ مل کر ردعمل کی افادیت اور مخصوصیت کو مؤثر طریقے سے بہتر کرتی ہے۔

◮ اصلاحی ردعمل کا نظام رد عمل کو پتہ لگانے کی زیادہ حساسیت، مضبوط تھرمل استحکام اور بہتر رواداری کا حامل بناتا ہے۔

◮ RT-qPCR آسان^TM(ایک مرحلہ) -SYBR گرین I کٹ ROX اندرونی حوالہ رنگ کے ساتھ آتی ہے، جس کا استعمال کنوؤں کے درمیان سگنل کے پس منظر اور سگنل کی خرابیوں کو ختم کرنے کے لیے کیا جا سکتا ہے، جو کہ صارفین کے لیے مقداری PCR آلات کے مختلف ماڈلز میں استعمال کرنے کے لیے آسان ہے۔

RT آسان^TMII (ماسٹر پریمکس برائے کے لیے فرسٹ اسٹرینڈ سی ڈی این اے کی ترکیبریئل ٹائم پی سی آر)

-جی ڈی این اے کو ہٹانے کی موثر صلاحیت، جو 2 منٹ کے اندر اندر ٹیمپلیٹ میں موجود جی ڈی این اے کو ہٹا سکتی ہے۔

-موثر ریورس ٹرانسکرپشن سسٹم، پہلے اسٹرینڈ سی ڈی این اے کی ترکیب کو مکمل کرنے میں صرف 15 منٹ لگتے ہیں۔

پیچیدہ ٹیمپلیٹس: اعلی GC مواد اور پیچیدہ ثانوی ساخت کے ساتھ ٹیمپلیٹس کو بھی اعلی کارکردگی کے ساتھ تبدیل کیا جا سکتا ہے۔

اعلیٰ حساسیت ریورس ٹرانسکرپشن سسٹم، پی جی لیول ٹیمپلیٹس بھی اعلیٰ معیار کا سی ڈی این اے حاصل کر سکتے ہیں۔

- ریورس ٹرانسکرپشن سسٹم میں تھرمل استحکام زیادہ ہے، زیادہ سے زیادہ رد عمل کا درجہ حرارت 42 ℃ ہے، اور اس میں اب بھی 50 ℃ پر ریورس ٹرانسکرپشن کی اچھی کارکردگی ہے۔