میرے ذہن میں پتہ لگانے والی ٹیکنالوجی کی تاریخ میں کئی انقلابی ایجادات امیونو لیبلنگ ٹیکنالوجی ہیں جو اینٹیجن اینٹی باڈی مخصوص بائنڈنگ، پی سی آر ٹیکنالوجی اور سیکوینسنگ ٹیکنالوجی کے اصول پر مبنی ہیں۔آج ہم PCR ٹیکنالوجی کے بارے میں بات کریں گے۔پی سی آر ٹیکنالوجی کے ارتقاء کے مطابق، لوگ عادتاً پی سی آر ٹیکنالوجی کو تین نسلوں میں تقسیم کرتے ہیں: عام پی سی آر ٹیکنالوجی، ریئل ٹائم فلوروسینٹ مقداری پی سی آر ٹیکنالوجی اور ڈیجیٹل پی سی آر ٹیکنالوجی۔
Cاومن پی سی آر تکنیک
کیری ملیس (1944.12.28-2019.8.7)
کیری ملس نے 1983 میں پولیمریز چین ری ایکشن (پولیمریز چین ری ایکشن، پی سی آر) ایجاد کیا۔ کہا جاتا ہے کہ جب وہ اپنی گرل فرینڈ کو گاڑی چلا رہا تھا، تو اچانک اس نے پی سی آر کے اصول (ڈرائیونگ کے فوائد پر) کے بارے میں سوچا۔کیری ملس کو 1993 میں کیمسٹری میں نوبل انعام سے نوازا گیا تھا۔ نیویارک ٹائمز نے تبصرہ کیا: "انتہائی اصلی اور اہم، تقریباً حیاتیات کو پی سی آر سے پہلے اور پی سی آر کے بعد کے ادوار میں تقسیم کرتا ہے۔
پی سی آر کا اصول: ڈی این اے پولیمریز کے کیٹالیسس کے تحت، مدر اسٹرینڈ ڈی این اے کو ٹیمپلیٹ کے طور پر استعمال کیا جاتا ہے، اور مخصوص پرائمر کو توسیع کے نقطہ آغاز کے طور پر استعمال کیا جاتا ہے، اور مدر اسٹرینڈ ٹیمپلیٹ ڈی این اے کے تکمیلی بیٹی اسٹرینڈ ڈی این اے کو ڈینیچریشن، اینیلنگ، ایکسٹینشن اور دیگر مراحل کے ذریعے وٹرو میں کاپی کیا جاتا ہے۔یہ وٹرو میں ڈی این اے سنتھیس ایمپلیفیکیشن ٹیکنالوجی ہے، جو وٹرو میں کسی بھی ہدف کے ڈی این اے کو تیزی سے اور خاص طور پر بڑھا سکتی ہے۔
عام پی سی آر کے فوائد
1.کلاسک طریقہ، مکمل بین الاقوامی اور گھریلو معیارات
2.آلے کے ری ایجنٹس کی کم قیمت
3.پی سی آر کی مصنوعات کو سالماتی حیاتیات کے دیگر تجربات کے لیے بازیافت کیا جا سکتا ہے۔
تجویز کردہ Foregene PCR مشین: https://www.foreivd.com/foreamp-sn-695-series-thermal-cycler-96-wells-pcr-machine-product/
متعلقہ مصنوعات: https://www.foreivd.com/pcr-herotm-with-dye-product/
عام پی سی آر کے نقصانات
1.آلودگی کرنا آسان ہے
2.بوجھل آپریشن
3.صرف معیار کا تجزیہ
4.اعتدال پسند حساسیت
5.غیر مخصوص پروردن ہے، اور جب غیر مخصوص بینڈ ٹارگٹ بینڈ کے سائز کے برابر ہو تو اس کی تمیز نہیں کی جا سکتی۔
Cاپلری الیکٹروفورسس پر مبنی پی سی آر
عام پی سی آر کی کوتاہیوں کے جواب میں، کچھ مینوفیکچررز نے کیپلیری الیکٹروفورسس کے اصول پر مبنی آلات متعارف کرائے ہیں۔کیپلیری میں پی سی آر ایمپلیفیکیشن کے بعد الیکٹروفورسس مرحلہ مکمل ہوجاتا ہے۔حساسیت زیادہ ہے، اور کئی بنیادوں کے فرق کو پہچانا جا سکتا ہے اور ایمپلیفیکیشن کا حساب MAERKER سے لگایا جا سکتا ہے۔مصنوعات کا مواد.نقصان یہ ہے کہ پی سی آر پروڈکٹ کو ابھی بھی کھولنے اور آلے میں ڈالنے کی ضرورت ہے، اور آلودگی کا بڑا خطرہ ہے۔
CاپلریEلیکٹروفورسس
2. ریئل ٹائم فلوروسینٹ مقداری پی سی آر (کوانٹیٹیو ریئل ٹائم پی سی آر، کیو پی سی آر) ٹیکنالوجیفلوروسینٹ مقداری پی سی آر، جسے ریئل ٹائم پی سی آر بھی کہا جاتا ہے، ایک نئی نیوکلک ایسڈ مقداری ٹیکنالوجی ہے جسے PE (پرکن ایلمر) نے 1995 میں تیار کیا تھا۔ فلوروسینٹ مقداری پی سی آر کی ترقی کی تاریخ ABI، Roche، اور Bio-Roche جیسے جنات کی روح کو ہلا دینے والی جدوجہد کی تاریخ ہے۔اگر آپ دلچسپی رکھتے ہیں، تو آپ اسے چیک کر سکتے ہیں۔یہ تکنیک فی الحال سب سے زیادہ پختہ اور وسیع پیمانے پر استعمال ہونے والی نیم مقداری PCR تکنیک ہے۔
تجویز کردہ qPCR مشین:https://www.foreivd.com/mini-real-time-pcr-system-forequant-sf2sf4-product/
فلوروسینٹ ڈائی طریقہ (SYBR گرین I):ایس وائی بی آر گرین I مقداری پی سی آر کے لیے سب سے زیادہ استعمال ہونے والا ڈی این اے بائنڈنگ ڈائی ہے، جو غیر خاص طور پر ڈبل سٹرینڈڈ ڈی این اے سے منسلک ہوتا ہے۔آزاد حالت میں، ایس وائی بی آر گرین کمزور فلوروسینس خارج کرتا ہے، لیکن ایک بار دوہرے پھنسے ہوئے ڈی این اے سے منسلک ہونے کے بعد، اس کا فلوروسینس 1000 گنا بڑھ جاتا ہے۔لہٰذا، رد عمل سے خارج ہونے والا کل فلوروسینٹ سگنل موجود دوہرے پھنسے ہوئے DNA کی مقدار کے متناسب ہے اور اس میں اضافہ مصنوعات کے اضافے کے ساتھ ہوگا۔چونکہ ڈائی غیر خاص طور پر ڈبل پھنسے ہوئے DNA سے منسلک ہوتا ہے، اس لیے غلط مثبت نتائج پیدا ہو سکتے ہیں۔
متعلقہ مصنوعات: https://www.foreivd.com/real-time-pcr-easytm-sybr-green-i-kit-product/
فلوروسینٹ تحقیقات کا طریقہ (تقمان ٹیکنالوجی): دورانپی سی آر ایمپلیفیکیشن، ایک مخصوص فلوروسینٹ پروب کو ایک ہی وقت میں پرائمر کے جوڑے کے طور پر شامل کیا جاتا ہے۔تحقیقات ایک لکیری اولیگونوکلیوٹائڈ ہے، جس کے دونوں سروں پر بالترتیب فلوروسینٹ رپورٹر گروپ اور فلوروسینٹ بجھانے والا گروپ لیبل لگا ہوا ہے۔جب تحقیقات برقرار ہوتی ہے تو، رپورٹر گروپ کی طرف سے خارج ہونے والے فلوروسینٹ سگنل کو بجھانے والے گروپ کے ذریعے جذب کیا جاتا ہے، اور پتہ لگانے میں کوئی فلوروسینٹ سگنل نہیں ہوتا ہے۔پی سی آر ایمپلیفیکیشن کے دوران (توسیع کے مرحلے میں)، Taq انزائم کی 5'-3' Dicer سرگرمی تحقیقات کو ہضم اور انحطاط کر دے گی، تاکہ رپورٹر فلوروسینٹ گروپ اور بجھانے والے فلوروسینٹ گروپ کو الگ کر دیا جائے، تاکہ فلوروسینٹ مانیٹرنگ سسٹم فلوروسینٹ سگنل وصول کر سکے، یعنی، ہر بار ڈی ایم فلو سی این اے کی شکل میں ایک حقیقی شکل ہوتی ہے۔ فلوروسینٹ سگنلز کے جمع ہونے اور پی سی آر مصنوعات کی تشکیل کی مکمل ہم آہنگی کو izes کرتا ہے۔تقمان تحقیقات کا طریقہ کلینیکل پتہ لگانے میں سب سے زیادہ استعمال ہونے والا پتہ لگانے کا طریقہ ہے۔
متعلقہ مصنوعات: https://www.foreivd.com/quickeasy%e1%b5%80%e1%b4%b9-real-time-pcr-kit-taqman-product/
کیو پی سی آر کے فوائد
1.طریقہ پختہ ہے اور معاون آلات اور ریجنٹس مکمل ہیں۔
2.ری ایجنٹس کی درمیانی قیمت
3.استعمال میں آسان
4.اعلی پتہ لگانے کی حساسیت اور مخصوصیت
کیو پی سی آر کے نقصانات
ٹارگٹ جین کی میوٹیشن کھو جانے کا پتہ لگانے کا باعث بنتی ہے۔
کم ارتکاز ٹیمپلیٹ کا پتہ لگانے کے نتیجے کا تعین نہیں کیا جاسکتا۔
مقداری پتہ لگانے کے لیے معیاری وکر کا استعمال کرتے وقت ایک بڑی خرابی ہے۔
3. ڈیجیٹل پی سی آر (ڈیجیٹل پی سی آر، ڈی پی سی آر) ٹیکنالوجی
ڈیجیٹل پی سی آر نیوکلک ایسڈ مالیکیولز کی مطلق مقدار کے لیے ایک تکنیک ہے۔qPCR کے مقابلے میں، ڈیجیٹل PCR DNA/RNA مالیکیولز کی تعداد کو براہ راست پڑھ سکتا ہے، جو کہ ابتدائی نمونے میں نیوکلک ایسڈ مالیکیولز کی مطلق مقدار ہے۔1999 میں، Bert Vogelstein اور Kenneth W. Kin-zler نے رسمی طور پر dPCR کا تصور پیش کیا۔
2006 میں، Fluidigm ایک تجارتی چپ پر مبنی dPCR آلہ تیار کرنے والا پہلا شخص تھا۔2009 میں، Life Technologies نے OpenArray اور QuantStudio 12K Flex dPCR سسٹمز کا آغاز کیا۔2013 میں، لائف ٹیکنالوجیز نے QuantStudio 3DdPCR سسٹم کا آغاز کیا، جو 20,000 انفرادی خلیوں میں یکساں طور پر نمونے تقسیم کرنے کے لیے ہائی ڈینسٹی نانوسکل مائیکرو فلائیڈک چپ ٹیکنالوجی کا استعمال کرتا ہے۔اچھی طرح سے ردعمل میں.
2011 میں، Bio-Rad نے قطرہ پر مبنی QX100 dPCR آلہ شروع کیا، جو پانی میں تیل کی ٹیکنالوجی کا استعمال کرتا ہے تاکہ نمونے کو 20,000 قطروں کے پانی میں تیل میں یکساں طور پر تقسیم کیا جا سکے، اور قطروں کا تجزیہ کرنے کے لیے ایک قطرہ تجزیہ کار کا استعمال کیا جائے۔2012 میں، RainDance نے RainDrop dPCR آلہ شروع کیا، جو ہائی پریشر گیس سے چلتا ہے، تاکہ ہر معیاری رد عمل کے نظام کو 1 ملین سے 10 ملین پکولیٹر سطح کے مائیکرو بوندوں پر مشتمل ری ایکشن ایملشن میں تقسیم کیا جا سکے۔
اب تک، ڈیجیٹل پی سی آر نے دو بڑے دھڑے بنائے ہیں، چپ ٹائپ اور ڈراپلیٹ ٹائپ۔اس سے کوئی فرق نہیں پڑتا ہے کہ ڈیجیٹل پی سی آر کس قسم کا ہے، اس کے بنیادی اصول کمزوری، اینڈ پوائنٹ پی سی آر اور پوسن کی تقسیم کو محدود کر رہے ہیں۔نیوکلک ایسڈ ٹیمپلیٹس پر مشتمل معیاری پی سی آر ری ایکشن سسٹم کو دسیوں ہزار پی سی آر ری ایکشنز میں یکساں طور پر تقسیم کیا گیا ہے، جو چپس یا مائیکرو ڈراپلیٹس میں تقسیم کیے جاتے ہیں، تاکہ ہر رد عمل میں ممکنہ حد تک ایک ٹیمپلیٹ مالیکیول شامل ہو، اور ایک واحد مالیکیول ٹیمپلیٹ PCR رد عمل انجام دیا جائے۔فلوروسینس کو پڑھ کر سگنل کی موجودگی یا غیر موجودگی کو شمار کیا جاتا ہے، اور مکمل مقدار کا تعین شماریاتی پوسن کی تقسیم کے انشانکن کے بعد کیا جاتا ہے۔
درج ذیل کئی ڈیجیٹل پی سی آر پلیٹ فارمز کی خصوصیات ہیں جو میں نے استعمال کی ہیں۔
1. Bio-Rad QX200 قطرہ ڈیجیٹل PCR Bio-RadQX200 ایک بہت ہی کلاسک ڈیجیٹل PCR پلیٹ فارم ہے، بنیادی پتہ لگانے کا عمل: 20,000 نمونے ڈراپلیٹ جنریٹر کے ذریعے تیار کیے جاتے ہیں پانی میں تیل کے مائیکرو بوندوں کو ایک عام PCR مشین پر بڑھایا جاتا ہے، اور آخر میں ہر مائیکرو ڈراپلیٹ کے فلوروسینس سگنل کو ایک مائیکرو ڈراپلیٹ ریڈر پڑھتا ہے۔آپریشن زیادہ پیچیدہ ہے، اور آلودگی کا خطرہ درمیانے درجے کا ہے۔
Xinyi TD1 مائکرو ڈراپلیٹ ڈیجیٹل پی سی آرXinyi TD1 ایک گھریلو ڈیجیٹل PCR پلیٹ فارم ہے، بنیادی پتہ لگانے کا عمل: ایک قطرہ جنریٹر کے ذریعے 30,000-50,000 پانی میں تیل کی بوندیں پیدا کریں، ایک عام PCR آلے کو بڑھا دیں، اور آخر میں پاس کریں قطرہ ریڈر ہر قطرہ کے فلوروسینٹ سگنل کو پڑھتا ہے۔اس پلیٹ فارم میں ڈراپلیٹ جنریشن اور پڑھنا دونوں ہی آلودگی کے کم خطرے کے ساتھ ایک سرشار چپ میں انجام پاتے ہیں۔
سٹیلا نائکا مائکرو ڈراپلیٹ چپ ڈیجیٹل پی سی آرSTILLA Naica نسبتاً نیا ڈیجیٹل PCR پلیٹ فارم ہے۔بنیادی پتہ لگانے کا عمل یہ ہے: چپ میں رد عمل کا حل شامل کریں، چپ کو مائیکرو ڈراپلیٹ جنریشن اور ایمپلیفیکیشن سسٹم میں ڈالیں، اور 30,000 مائیکرو بوندیں بنائیں۔چپ پر پھیلائیں، اور پی سی آر پروردن چپ پر مکمل ہو گیا ہے۔پھر ایمپلیفائیڈ چپ کو مائیکرو ڈراپلیٹ ریڈنگ اینالیسس سسٹم میں منتقل کیا جاتا ہے، اور فلوروسینٹ سگنل کو تصاویر لے کر پڑھا جاتا ہے۔چونکہ پورا عمل بند چپ میں ہوتا ہے، اس لیے آلودگی کا خطرہ کم ہوتا ہے۔
4. تھرمو فشر کوانٹ اسٹوڈیو تھری ڈی چپ ڈیجیٹل پی سی آر
ThermoFisher QuantStudio 3D ایک اور کلاسک چپ پر مبنی ڈیجیٹل PCR پلیٹ فارم ہے۔اس کا بنیادی پتہ لگانے کا عمل یہ ہے: اسپریڈر میں رد عمل کا محلول شامل کریں، اور اسپریڈر کے ذریعے 20,000 مائیکرو ویلز کے ساتھ چپ پر یکساں طور پر رد عمل کے محلول کو پھیلائیں۔، چپ کو پی سی آر مشین پر بڑھا دیں، اور آخر میں چپ کو ریڈر میں ڈالیں اور فلوروسینٹ سگنل کو پڑھنے کے لیے تصویر لیں۔آپریشن نسبتاً پیچیدہ ہے، اور پورا عمل بند چپ میں کیا جاتا ہے، اور آلودگی کا خطرہ کم ہے۔
5. JN MEDSYS کلیرٹی چپ ڈیجیٹل پی سی آر
JN MEDSYS Clarity ایک نسبتاً نیا چپ قسم کا ڈیجیٹل PCR پلیٹ فارم ہے۔اس کا بنیادی پتہ لگانے کا عمل یہ ہے: درخواست دہندہ میں رد عمل کا محلول شامل کریں، اور درخواست دہندہ کے ذریعے PCR ٹیوب میں لگائی گئی 10,000 PCR ٹیوبوں پر یکساں طور پر ردعمل کے محلول کو پھیلائیں۔مائکروپورس چپ پر، رد عمل کا محلول کیپلیری ایکشن کے ذریعے چپ میں داخل ہوتا ہے، اور چپ کے ساتھ پی سی آر ٹیوب کو پی سی آر مشین پر ایمپلیفیکیشن کے لیے رکھا جاتا ہے، اور آخر میں چپ کو ریڈر میں ڈال دیا جاتا ہے تاکہ فوٹو کھینچ کر فلوروسینٹ سگنل پڑھ سکیں۔آپریشن زیادہ پیچیدہ ہے۔آلودگی کا خطرہ کم ہے۔
ہر ڈیجیٹل پی سی آر پلیٹ فارم کے پیرامیٹرز کا خلاصہ اس طرح کیا گیا ہے:
ڈیجیٹل پی سی آر پلیٹ فارم کے تشخیصی اشارے یہ ہیں: تقسیم شدہ یونٹوں کی تعداد، فلوروسینٹ چینلز کی تعداد، آپریشن کی پیچیدگی اور آلودگی کا خطرہ۔لیکن سب سے اہم چیز پتہ لگانے کی درستگی ہے۔ڈیجیٹل پی سی آر پلیٹ فارمز کا جائزہ لینے کا ایک طریقہ یہ ہے کہ ایک دوسرے کی تصدیق کے لیے متعدد ڈیجیٹل پی سی آر پلیٹ فارمز کا استعمال کیا جائے، اور دوسرا طریقہ درست اقدار کے ساتھ معیاری مادوں کا استعمال کرنا ہے۔
ڈی پی سی آر کے فوائد
1.مطلق مقدار کا حصول
2.اعلی حساسیت اور مخصوصیت
3.کم کاپی کے نمونوں کا پتہ لگاسکتے ہیں۔
ڈی پی سی آر کے نقصانات1. مہنگے سامان اور ری ایجنٹس 2. پیچیدہ آپریشن اور طویل پتہ لگانے کا وقت 3. پتہ لگانے کی حد تنگ
اس وقت، پی سی آر ٹیکنالوجی کی تین نسلوں کے اپنے فوائد اور نقصانات ہیں، اور ہر ایک کے اپنے اطلاق کے شعبے ہیں، اور یہ کوئی تعلق نہیں ہے کہ ایک نسل دوسری کی جگہ لے لے۔ٹیکنالوجی کی مسلسل ترقی نے پی سی آر ٹیکنالوجی میں نئی جان ڈالی ہے، جس سے یہ ایک کے بعد ایک درخواست کی سمت کو کھولنے کے قابل بناتی ہے، جس سے نیوکلک ایسڈ کا پتہ لگانا زیادہ آسان اور درست ہوتا ہے۔
ماخذ: ڈاکٹر یوآن آپ کو جانچ کے لیے لے جاتے ہیں۔
تجویز کردہ مصنوعات:
پوسٹ ٹائم: نومبر-18-2022
