W:بھائی، ریورس ٹرانسکرپشن مکمل ہو گیا، اور آخر کار آخری مرحلہ - فلوروسینٹ مقداری PCR!ارے بھائی، ریئل ٹائم مقداری پی سی آر کیا ہے؟
M:PCR آپ ہمیشہ جانتے ہیں، ٹھیک ہے؟
W:آپ جانتے ہیں، PCR پولیمریز چین ری ایکشن ہے، اور یہ ایک ایسی ٹیکنالوجی ہے جو DNA کو بڑھاتی ہے!
M:یہ تقریباً ہے… مخصوص پرائمر کے ذریعے ہدف کی ترتیب کو دس لاکھ سے زیادہ مرتبہ بڑھانا ایک تکنیکی طریقہ ہے، لیکن یہ صرف ہدف کی ترتیب کی موجودگی یا غیر موجودگی کی نشاندہی کرتا ہے، اور ابتدائی ٹیمپلیٹ کی مقدار کا تعین نہیں کر سکتا۔فلوروسینس مقداری پی سی آر ایک تکنیکی طریقہ ہے جو اس مسئلے کو حل کرنے کے لیے تیار کیا گیا ہے۔ریئل ٹائم PCR اور مقدار PCR (qPCR) عام طور پر اس کا حوالہ دیتے ہیں۔
ڈبلیو: عام پی سی آر سے فرق فلوروسینس کوانٹیفیکیشن میں ہے؟
M:جی ہاں، یعنی، ہر PCR سائیکل کے توسیعی مرحلے میں، فلوروسینس سگنل کی شدت کا پتہ چل جاتا ہے، اور ابتدائی ٹیمپلیٹ کی رقم کا حساب سگنل کی شدت کی تبدیلی کے مطابق کیا جا سکتا ہے۔
W: یہ بہت پیچیدہ محسوس ہوتا ہے!کیا مجھے اس کا حساب خود کرنا ہوگا؟
M:اس کے لیے آپ کو آہستہ آہستہ سیکھنے کی ضرورت ہے، اصول کو سمجھنے کے قابل ہونا بہتر ہے۔اب آپ سب سے پہلے CT قدر پر توجہ مرکوز کر سکتے ہیں، جو کہ نسبتاً بدیہی تجرباتی ڈیٹا ہے، اور اس کا سائز ابتدائی ٹیمپلیٹ کی مقدار کے سائز کے مساوی ہے۔یہاں گراف بھی ہیں جیسے ایمپلیفیکیشن منحنی خطوط اور پگھلنے والے منحنی خطوط۔ان کے پاس حتمی فیصلہ ہے کہ آیا آپ کا تجربہ کامیاب ہے یا نہیں۔
ڈبلیو: اوہ بھائی۔پھر میں qPCR تجربہ کرنے جا رہا ہوں!
ایم: خصوصی توجہ دیں کہ ری ایجنٹ والے حصے میں ٹیمپلیٹس شامل نہ کریں، ورنہ آپ کا غیر استعمال شدہ مکس آسانی سے آلودہ ہو جائے گا!
ڈبلیو: سمجھ گیا!

ریئل ٹائم PCR Easyᵀᴹ-SYBR گرین I کٹ

اعلی کارکردگی، زیادہ مخصوصیت
اعلی سنویدنشیلتا، اچھی مطابقت