اینٹی باڈیز، جسے امیونوگلوبلینز (Ig) بھی کہا جاتا ہے، وہ گلائکوپروٹین ہیں جو خاص طور پر اینٹیجنز سے منسلک ہوتے ہیں۔
 
روایتی اینٹی باڈی کی تیاری جانوروں کو حفاظتی ٹیکوں اور اینٹی سیرم کو جمع کرکے تیار کی جاتی ہے۔لہذا، اینٹی سیرم میں عام طور پر دوسرے غیر متعلقہ اینٹیجنز اور سیرم میں پروٹین کے دیگر اجزاء کے خلاف اینٹی باڈیز ہوتی ہیں۔عام اینٹیجن مالیکیولز زیادہ تر متعدد مختلف ایپیٹوپس پر مشتمل ہوتے ہیں، لہذا روایتی اینٹی باڈیز بھی متعدد مختلف ایپیٹوپس کے خلاف اینٹی باڈیز کا مرکب ہیں۔یہاں تک کہ روایتی سیرم اینٹی باڈیز جو ایک ہی ایپیٹوپ کے خلاف ہدایت کی گئی ہیں اب بھی مختلف بی سیل کلون کے ذریعہ تیار کردہ متفاوت اینٹی باڈیز پر مشتمل ہیں۔لہذا، روایتی سیرم اینٹی باڈیز کو پولی کلونل اینٹی باڈیز، یا مختصراً پولی کلونل اینٹی باڈیز بھی کہا جاتا ہے۔
 
مونوکلونل اینٹی باڈی (مونوکلونل اینٹی باڈی) ایک انتہائی یکساں اینٹی باڈی ہے جو ایک بی سیل کلون کے ذریعہ تیار کی جاتی ہے اور صرف ایک مخصوص ایپیٹوپ کے خلاف ہدایت کی جاتی ہے۔یہ عام طور پر ہائبرڈوما ٹکنالوجی کے ذریعہ تیار کیا جاتا ہے — ہائبرڈوما اینٹی باڈی ٹیکنالوجی سیل فیوژن ٹیکنالوجی پر مبنی ہے، بی خلیوں کو مخصوص اینٹی باڈیز اور مائیلوما خلیوں کو بی سیل ہائبرڈوما میں لامحدود ترقی کی صلاحیت کے ساتھ اخراج کرنے کی صلاحیت کے ساتھ ملاتی ہے۔اس ہائبرڈوما سیل میں پیرنٹ سیل کی خصوصیات ہیں۔یہ مائیلوما خلیات کی طرح وٹرو میں غیر معینہ مدت تک اور لافانی طور پر پھیل سکتا ہے، اور یہ مخصوص اینٹی باڈیز جیسے سپلینک لیمفوسائٹس کی ترکیب اور اخراج کر سکتا ہے۔کلوننگ کے ذریعے، ایک واحد ہائبرڈوما سیل سے اخذ کردہ مونوکلونل لائن، یعنی ایک ہائبرڈوما سیل لائن، حاصل کی جاسکتی ہے۔یہ جو اینٹی باڈیز تیار کرتا ہے وہ ایک ہی اینٹی جینک ڈیٹرمیننٹ کے خلاف انتہائی یکساں اینٹی باڈیز ہیں، یعنی مونوکلونل اینٹی باڈیز۔
 
اینٹی باڈیز ایک یا زیادہ Y کی شکل کے مونومر (یعنی مونوکلونل اینٹی باڈیز یا پولی کلونل اینٹی باڈیز) کے طور پر موجود ہیں۔ہر Y کے سائز کا مونومر 4 پولی پیپٹائڈ چینز پر مشتمل ہوتا ہے، جس میں دو ایک جیسی ہیوی چینز اور دو ایک جیسی لائٹ چینز شامل ہیں۔ہلکی زنجیر اور بھاری زنجیر کا نام ان کے مالیکیولر وزن کے مطابق رکھا گیا ہے۔Y کے سائز کے ڈھانچے کا سب سے اوپر متغیر علاقہ ہے، جو اینٹیجن بائنڈنگ سائٹ ہے۔(ڈیٹائی بائیو مونوکلونل اینٹی باڈی تصور سے اقتباس)
 
اینٹی باڈی کا ڈھانچہ
بھاری زنجیر
ممالیہ Ig بھاری زنجیر کی پانچ اقسام ہیں، جن کا نام یونانی حروف α، δ، ε، γ، اور μ ہے۔متعلقہ اینٹی باڈیز کو IgA، IgD، IgE، IgG، اور IgM کہا جاتا ہے۔مختلف بھاری زنجیریں سائز اور ساخت میں مختلف ہوتی ہیں۔α اور γ میں تقریباً 450 امینو ایسڈ ہوتے ہیں، جبکہ μ اور ε میں تقریباً 550 امینو ایسڈ ہوتے ہیں۔
ہر بھاری زنجیر کے دو علاقے ہوتے ہیں: مستقل خطہ اور متغیر خطہ۔ایک ہی قسم کے تمام اینٹی باڈیز کا ایک ہی مستقل علاقہ ہوتا ہے، لیکن مختلف اقسام کے اینٹی باڈیز کے درمیان فرق ہوتا ہے۔بھاری زنجیروں کے مستقل علاقے γ, α, اور δ ٹینڈم میں تین Ig ڈومینز پر مشتمل ہیں، اس کی لچک کو بڑھانے کے لیے قبضے کے علاقے کے ساتھ؛بھاری زنجیروں کے مستقل علاقے μ اور ε 4 Ig ڈومینز پر مشتمل ہیں۔مختلف B خلیوں کے ذریعہ تیار کردہ اینٹی باڈی کی بھاری زنجیر کا متغیر علاقہ مختلف ہے، لیکن ایک ہی B سیل یا سیل کلون کے ذریعہ تیار کردہ اینٹی باڈی کا متغیر خطہ ایک ہی ہے، اور ہر بھاری زنجیر کا متغیر خطہ لمبائی میں تقریباً 110 امینو ایسڈز پر مشتمل ہے۔، اور ایک واحد Ig ڈومین تشکیل دیں۔
 
ہلکی زنجیر
ستنداریوں میں ہلکی زنجیر کی صرف دو قسمیں ہیں: لیمبڈا ٹائپ اور کپا ٹائپ۔ہر لائٹ چین میں دو منسلک ڈومینز ہوتے ہیں: ایک مستقل خطہ اور ایک متغیر خطہ۔لائٹ چین کی لمبائی تقریباً 211 ~ 217 امینو ایسڈ ہے۔ہر اینٹی باڈی میں موجود دو روشنی کی زنجیریں ہمیشہ ایک جیسی ہوتی ہیں۔ستنداریوں کے لیے، ہر اینٹی باڈی میں لائٹ چین کی صرف ایک قسم ہوتی ہے: کپا یا لیمبڈا۔کچھ نچلے فقرے میں، جیسے کارٹیلیجینس مچھلی (کارٹلیج مچھلی) اور ہڈیوں والی مچھلیاں، دیگر قسم کی ہلکی زنجیریں جیسے iota (iota) قسم بھی پائی جاتی ہیں۔
 
فیب اور ایف سی سیگمنٹس
اینٹی باڈیز کو لیبل کرنے کے لیے ایف سی سیگمنٹ کو براہ راست انزائمز یا فلوروسینٹ رنگوں کے ساتھ ملایا جا سکتا ہے۔یہ وہ حصہ ہے جہاں ELISA کے عمل کے دوران اینٹی باڈی پلیٹ پر پھوٹتی ہے، اور یہ وہ حصہ بھی ہے جہاں دوسرے اینٹی باڈی کو امیونوپریسیپیٹیشن، امیونوبلوٹنگ اور امیونو ہسٹو کیمسٹری میں پہچانا اور پابند کیا جاتا ہے۔اینٹی باڈیز کو دو F(ab) حصوں اور ایک Fc حصے میں پروٹولوٹک انزائمز جیسے papain کے ذریعے ہائیڈولائز کیا جا سکتا ہے، یا انہیں قبضے کے علاقے سے پیپسن کے ذریعے توڑ کر ایک F(ab)2 طبقہ اور ایک Fc طبقہ میں ہائیڈولائز کیا جا سکتا ہے۔آئی جی جی اینٹی باڈی کے ٹکڑے بعض اوقات بہت مفید ہوتے ہیں۔Fc طبقہ کی کمی کی وجہ سے، F(ab) طبقہ اینٹیجن کے ساتھ تیز نہیں ہو گا، اور نہ ہی Vivo مطالعات میں اسے مدافعتی خلیات کے ذریعے پکڑا جائے گا۔چھوٹے مالیکیولر ٹکڑوں اور کراس لنکنگ فنکشن کی کمی کی وجہ سے (Fc سیگمنٹ کی کمی کی وجہ سے)، Fab سیگمنٹ عام طور پر فنکشنل اسٹڈیز میں ریڈیو لیبلنگ کے لیے استعمال ہوتا ہے، اور Fc سیگمنٹ بنیادی طور پر ہسٹو کیمیکل سٹیننگ میں بلاکنگ ایجنٹ کے طور پر استعمال ہوتا ہے۔
 
متغیر اور مستقل علاقے
متغیر خطہ (V خطہ) N-ٹرمینس کے قریب H سلسلہ کے 1/5 یا 1/4 (تقریبا 118 امینو ایسڈ کی باقیات پر مشتمل) اور L سلسلہ کے N-ٹرمینس کے قریب 1/2 (تقریباً 108-111 امینو ایسڈ کی باقیات پر مشتمل) پر واقع ہے۔ہر V خطے میں ایک پیپٹائڈ کی انگوٹھی ہوتی ہے جو انٹرا چین ڈسلفائیڈ بانڈز سے بنتی ہے، اور ہر پیپٹائڈ رنگ میں تقریباً 67 سے 75 امینو ایسڈ کی باقیات ہوتی ہیں۔V خطے میں امینو ایسڈ کی تشکیل اور ترتیب اینٹی باڈی کی اینٹیجن بائنڈنگ خصوصیت کا تعین کرتی ہے۔V خطے میں امینو ایسڈز کی مسلسل بدلتی ہوئی اقسام اور ترتیب کی وجہ سے، مختلف پابند اینٹیجن خصوصیات کے ساتھ کئی قسم کے اینٹی باڈیز بن سکتے ہیں۔L چین اور H چین کے V علاقوں کو بالترتیب VL اور VH کہا جاتا ہے۔VL اور VH میں، امینو ایسڈ کی ساخت اور کچھ مقامی علاقوں کی ترتیب میں بہت زیادہ تغیر پایا جاتا ہے۔ان علاقوں کو ہائپر ویری ایبل ریجنز (HVR) کہا جاتا ہے۔V خطے میں غیر HVR حصوں کی امینو ایسڈ کی ساخت اور ترتیب نسبتاً قدامت پسند ہے، جسے فریم ورک ریجن کہا جاتا ہے۔VL میں تین ہائپر ویری ایبل ریجنز ہیں، جو عام طور پر بالترتیب 24 سے 34 اور 89 سے 97 پر امینو ایسڈ کی باقیات پر واقع ہوتے ہیں۔VL اور VH کے تین HVRs کو بالترتیب HVR1، HVR2 اور HVR3 کہا جاتا ہے۔ایکس رے کرسٹل کے پھیلاؤ کی تحقیق اور تجزیہ نے ثابت کیا کہ ہائپر ویری ایبل خطہ واقعتاً وہ جگہ ہے جہاں اینٹی باڈی اینٹیجن جوڑتا ہے، اس لیے اسے تکمیلی تعین کرنے والا خطہ (CDR) کہا جاتا ہے۔VL اور VH کے HVR1، HVR2 اور HVR3 کو بالترتیب CDR1، CDR2 اور CDR3 کہا جا سکتا ہے۔عام طور پر، CDR3 میں ہائپر ویری ایبلٹی کی اعلی ڈگری ہوتی ہے۔ہائپر ویری ایبل خطہ بھی اہم مقام ہے جہاں Ig مالیکیولز کے idiotypic determinants موجود ہیں۔زیادہ تر معاملات میں، ایچ چین اینٹیجن کے پابند ہونے میں زیادہ اہم کردار ادا کرتا ہے۔
مستقل خطہ (C خطہ)C ٹرمینس کے قریب H چین کے 3/4 یا 4/5 (تقریباً امینو ایسڈ 119 سے C ٹرمینل تک) اور L چین کے C ٹرمینس کے قریب 1/2 (تقریباً 105 امینو ایسڈ کی باقیات پر مشتمل ہے) پر واقع ہے۔ایچ چین کے ہر فعال علاقے میں تقریباً 110 امینو ایسڈ کی باقیات ہوتی ہیں، اور اس میں ایک پیپٹائڈ کی انگوٹھی ہوتی ہے جو 50-60 امینو ایسڈ کی باقیات پر مشتمل ہوتی ہے جو ڈسلفائیڈ بانڈز سے جڑے ہوتے ہیں۔اس خطے کی امینو ایسڈ کی ساخت اور ترتیب ایک ہی جانور Ig isotype L چین اور اسی قسم کی H چین میں نسبتاً مستقل ہے۔یکساں، یہ صرف متعلقہ اینٹیجن سے خاص طور پر منسلک ہو سکتا ہے، لیکن اس کے C خطے کی ساخت ایک جیسی ہے، یعنی اس کی اینٹی جینسٹی ایک جیسی ہے۔گھوڑے کے اینٹی ہیومن آئی جی جی سیکنڈری اینٹی باڈی (یا اینٹی اینٹی باڈی) کو دو اینٹی باڈیز (آئی جی جی) کے امتزاج کے ساتھ ملایا جا سکتا ہے مختلف exotoxins کے خلاف ہوتا ہے۔یہ ثانوی اینٹی باڈیز کی تیاری اور فلوروسین، آاسوٹوپس، انزائمز اور دیگر لیبل شدہ اینٹی باڈیز لگانے کے لیے ایک اہم بنیاد ہے۔
 
 
متعلقہ مصنوعات:
سیل ڈائریکٹ RT-qPCR کٹ